Ingénierie Moléculaire at Université De Montpellier II | Flashcards & Summaries

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Lernmaterialien für Ingénierie moléculaire an der Université de Montpellier II

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TESTE DEIN WISSEN
Quel(s) cofacteur(s) utilisent les ADN polymérases ?
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TESTE DEIN WISSEN
Les ADN polymérases nécessitent du magnésium (Mg²+)
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les polymérases utilisées en laboratoire ? Pourquoi ?
Laquelle a la plus forte processivité ?
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TESTE DEIN WISSEN
Les polymérases utilisées en laboratoire sont les polymérases 1 de procaryotes (parce que celles eucaryotes sont des complexes multiprotéiques et donc il faudrait mettre tous les facteurs de transcription dans le tube pour pouvoir lancer l'enzyme).
Il existe deux ADN polymérases procaryotes principalement utilisables : la 1 et la 3
La 1 a une moins bonne processivité (10-20 pb/s) que la 3 (1000 pb/s).
Le problème est que la 3 est multiprotéique, donc on se retrouve avec le même problème que pour les ADN polymérases eucaryotes.
On va donc utiliser l'ADN polymérase 1.
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés des ADN polymérases T4 ?
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TESTE DEIN WISSEN
Meilleure processivité que la pol 1 et Klenow, exonucléase 5'-3'
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés de la Taq polymérase
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TESTE DEIN WISSEN
  • Polymérase thermorésistente, active à 75-80°C
  • Pas d'activité exonucléase 3'-5' -> beaucoup de mésappariement
  • Activité exonucléase 5'-3'
  • Activité Adényl terminal transférase : ajout d'un seul
  • A à la fin de chaque élongation (pas besoin de matrice pour le faire non plus)
  • Amplifie des fragments de 3000pb
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés de la Pfu ?
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TESTE DEIN WISSEN
  • Activité exonucléase 3'-5' et aussi 5'-3'
  • Plus fidèle que la Taq
  • Processivité plus faible que la Taq pour la polymérisation
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés des terminal transférases ?
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TESTE DEIN WISSEN
  • Ajoute des nucléotides en 3' sans matrice
  • Ajout de dNTP ou de ddNTP
  • Ajout de purine (A ou G) si Mg2+ ou de pyrimidine (T ou C) si Mn2+ ou Co2+
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TESTE DEIN WISSEN
Quels sont les ARN polymérases utilisées ? Pourquoi ? Quels sont les problèmes avec les autres ?
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TESTE DEIN WISSEN
On utilise les ARN polymérases de phages. 
Besoin que d'un seul promoteur, unique et spécifique, et pas besoin de cofacteur. (On va mettre le promoteur en aval du/des gène(s).
On va utiliser les enzymes T3, T7, et SP6 ARN pol.

Les autres polymérases ont besoin de promoteurs particuliers, sont multimériques (donc besoin de cofacteur), et certains besoin de promoteurs distaux.
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les activités enzymatiques de l'ADN polymérase ?
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TESTE DEIN WISSEN
  • Polymérase 5'-3'
  • Exonuclease 3'-5'

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TESTE DEIN WISSEN
Quel(s) cofacteur(s) utilisent les ARN polymérases ?
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TESTE DEIN WISSEN
Ils utilisent le magnésium Mg2+
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TESTE DEIN WISSEN
Qu'est-ce que le fragment de Klenow ? Comment cette protéine a été trouvée ?
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TESTE DEIN WISSEN
Le fragment de Klenow est une ADN polymérase 1 à laquelle on a retiré son domaine exonucléase 5'-3' grâce à l'utilisation de subtiline.
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés de la reverse transcriptase ?
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TESTE DEIN WISSEN
  • ADN polymérase ARN dépendante
  • (Activité Rinonucléase H)
  • Pas d'activité d'exonucléase 3'-5' (mutations possibles)
Utilisé pour l'étude des ARN (on va faire un ADNc qui sera analysé)
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TESTE DEIN WISSEN
Quelles sont les propriétés de la T7 ?
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TESTE DEIN WISSEN
Mêmes propriétés que la T4 (processivité meilleure que la pol 1 et Klenow, exonucléase 5'-3').
La T7 modifiée = séquenase mais on a retiré l'activité exonucléase.
Utilisée pour le séquençage
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Q:
Quel(s) cofacteur(s) utilisent les ADN polymérases ?
A:
Les ADN polymérases nécessitent du magnésium (Mg²+)
Q:
Quelles sont les polymérases utilisées en laboratoire ? Pourquoi ?
Laquelle a la plus forte processivité ?
A:
Les polymérases utilisées en laboratoire sont les polymérases 1 de procaryotes (parce que celles eucaryotes sont des complexes multiprotéiques et donc il faudrait mettre tous les facteurs de transcription dans le tube pour pouvoir lancer l'enzyme).
Il existe deux ADN polymérases procaryotes principalement utilisables : la 1 et la 3
La 1 a une moins bonne processivité (10-20 pb/s) que la 3 (1000 pb/s).
Le problème est que la 3 est multiprotéique, donc on se retrouve avec le même problème que pour les ADN polymérases eucaryotes.
On va donc utiliser l'ADN polymérase 1.
Q:
Quelles sont les propriétés des ADN polymérases T4 ?
A:
Meilleure processivité que la pol 1 et Klenow, exonucléase 5'-3'
Q:
Quelles sont les propriétés de la Taq polymérase
A:
  • Polymérase thermorésistente, active à 75-80°C
  • Pas d'activité exonucléase 3'-5' -> beaucoup de mésappariement
  • Activité exonucléase 5'-3'
  • Activité Adényl terminal transférase : ajout d'un seul
  • A à la fin de chaque élongation (pas besoin de matrice pour le faire non plus)
  • Amplifie des fragments de 3000pb
Q:
Quelles sont les propriétés de la Pfu ?
A:
  • Activité exonucléase 3'-5' et aussi 5'-3'
  • Plus fidèle que la Taq
  • Processivité plus faible que la Taq pour la polymérisation
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Q:
Quelles sont les propriétés des terminal transférases ?
A:
  • Ajoute des nucléotides en 3' sans matrice
  • Ajout de dNTP ou de ddNTP
  • Ajout de purine (A ou G) si Mg2+ ou de pyrimidine (T ou C) si Mn2+ ou Co2+
Q:
Quels sont les ARN polymérases utilisées ? Pourquoi ? Quels sont les problèmes avec les autres ?
A:
On utilise les ARN polymérases de phages. 
Besoin que d'un seul promoteur, unique et spécifique, et pas besoin de cofacteur. (On va mettre le promoteur en aval du/des gène(s).
On va utiliser les enzymes T3, T7, et SP6 ARN pol.

Les autres polymérases ont besoin de promoteurs particuliers, sont multimériques (donc besoin de cofacteur), et certains besoin de promoteurs distaux.
Q:
Quelles sont les activités enzymatiques de l'ADN polymérase ?
A:
  • Polymérase 5'-3'
  • Exonuclease 3'-5'

Q:
Quel(s) cofacteur(s) utilisent les ARN polymérases ?
A:
Ils utilisent le magnésium Mg2+
Q:
Qu'est-ce que le fragment de Klenow ? Comment cette protéine a été trouvée ?
A:
Le fragment de Klenow est une ADN polymérase 1 à laquelle on a retiré son domaine exonucléase 5'-3' grâce à l'utilisation de subtiline.
Q:
Quelles sont les propriétés de la reverse transcriptase ?
A:
  • ADN polymérase ARN dépendante
  • (Activité Rinonucléase H)
  • Pas d'activité d'exonucléase 3'-5' (mutations possibles)
Utilisé pour l'étude des ARN (on va faire un ADNc qui sera analysé)
Q:
Quelles sont les propriétés de la T7 ?
A:
Mêmes propriétés que la T4 (processivité meilleure que la pol 1 et Klenow, exonucléase 5'-3').
La T7 modifiée = séquenase mais on a retiré l'activité exonucléase.
Utilisée pour le séquençage
Ingénierie moléculaire

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