BC Antestate an der Universität Mainz

Karteikarten und Zusammenfassungen für BC Antestate an der Universität Mainz

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Methoden zum NW von Gelbanden nennen

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Erkläre den Begriff PAGE

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Erkläre die Biuret-Methode

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Beschreibe die Papierelektrophorese

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Erkläre die SDS-Page-Elektrophorese

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Welche Aussagen zu Globulinen treffen zu?

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Beschreibe die Isoelektrische Fokussierung

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Welche der folgenden Aussagen sind zutreffend?

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Wozu wird Coomassie Brilliant Blue-Methode verwendet und wie wird sie durchgeführt?

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Beschreibe Zweck und Methodik der Serumelektrophorese

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Welche Aussagen zu Albuminen treffen zu?

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Erkläre die Silber- und Fluorescamin

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BC Antestate

Methoden zum NW von Gelbanden nennen

-Silberfärbung

-Coomassie Brilliant Blue

-Fluorescamin

-Audioradiagramm


BC Antestate

Erkläre den Begriff PAGE

PAGE: Polyacrymalid-Gelelektrophorese

-10 cm langes Rohr mit Polymerisiertem Gel wird zw. 2 Pufferreservoirs mit Elektroden geleget, oder auf Platte 8slab-Gel)

-Puffer im basischen: Alle Teilchen neg. Geladen --> Wanderung zur Anode

- 10 Mykrogramm Substanz in Glycerin o. Saccharose-Lsg. auflösen

-Probe auf Kathodenseite auftragen. 

-ca. 90 min. Gleichstrom bei 200V, danach Sichtbarmachung der Banden

-Gel aus: Acryllamid + Methylenbisacrylamid --> Quervernetzung

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Erkläre die Biuret-Methode

-Verb. mit mindestens 2 Peptidbindungen (oder Biuret) gehen farbige Komplexe mit Cu(II)-Ionen ein --> Blaue Färbung

-Intensität der Färbung ist proportional zur Anzahl der Peptidbindungen und Proteinkonzentration

-Biuret entsteht durch Kondensation von Harnstoff

-Unspezifisch, da z.B Tyrosinreste auch komplexieren

-Nachweisgrenze: 1-10 Mirkogramm/ml

BC Antestate

Beschreibe die Papierelektrophorese

Medium: Filterpapier o. Cellulose-Acetat

-Enden d. Papiers in Pufferreservoirs mit Elektroden

-Ionen wandern mit charakterist. Geschw. eine char. Distanz

-meist E von 20Vcm^-1

-Hohe Diffusionsgeschw. begrenzt Auflösung

-Trennung nach Ladung

-Fingerprinting: Erst Chroma, dann Ephorese

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Erkläre die SDS-Page-Elektrophorese

-Trennung denaturierter Proteine in Acrylamidgel nach ihrer Masse

-Porengröße des Trägers variabel

-Detergenz: Natriumdodecylsulfat (zerstört alle nicht-kovalenten Bindungen), bindet sehr fest an Proteine

-überdeckt Ladung des Proteins mit eigener

-trennt die Proteine durch Siebeffekt im Gel

--> Große Proteine wandern langsamer als kleinere

-Zusatz von Markern bekannter Masse

- Mercaptoethanol, DDT oder  DTE als RedMittel zur Zersetzung von Disulfidbrücken.


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Welche Aussagen zu Globulinen treffen zu?

Chronische Entzündungen führen zu höheren Anteilen von Gamma-Globulinen

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Beschreibe die Isoelektrische Fokussierung

-Elektrophoretische Trennung eines Protein-Gemischs in einer Lösung mit stabilem pH-Gradienten von Anode zu Kathode

-Proteine wandern zur Position die ihrem pKi entspricht und bleiben dort stehen--> Zwitterion

-Schmale Banden mit 0,01 pH-Einheit

-hervorragende Trennleistung und scharfe Banden

-pH-Gradient:

  - Entsteht durch unterschiedliche Verhältnisse von Carboxy-Gruppen und aliphatischen Gruppen in Oligopeptiden

   - Enthält Trägerampholyte. Diese können gezielt pH-Bereiche abdecken

   - Ordnen sich im E-Feld

- Saure Proteine gehen zur Anode, Basische zur Kathode



BC Antestate

Welche der folgenden Aussagen sind zutreffend?

Albumine sind für 10% des kolloidosmotischen Druckes im Blut verantwortlich.

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Wozu wird Coomassie Brilliant Blue-Methode verwendet und wie wird sie durchgeführt?

-Gelbandennachweis:

Gel wird in saure alkoholische Farbstofflösung eingelegt, es bildet sich ein Farbkomplex. NW von weniger als ein Mikrogramm.

BC Antestate

Beschreibe Zweck und Methodik der Serumelektrophorese

-Zweck: Bestimmung der Proteine des Blutserums durch Ephorese mit Cellulose-Acetat oder Agarose-GEl

-Man nutzt Serum ohne Gerinnungsfaktoren, Plasma enthält Fibrinogen und täuscht monoklonale Banden vor

-Auch keine hämolytischen Proben, da Alpha-2 und beta faktoren erhöht sind

- 5 Fraktionen: Albumin (58-70%), Alpha-1 (1,5-4), Alpha-2 (5-10), beta (8,0-13,0), Gamma (10-19)

- Anschließend Färbung mit Amidoschwarz und Messung durch "Densitometrie" (Farbdichte-Messung) 


BC Antestate

Welche Aussagen zu Albuminen treffen zu?

In der Serumelektrophorese stellen sie mengenmäßig den größten Anteil dar.

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Erkläre die Silber- und Fluorescamin

Silberfärbung: 

-Proteine werden in LSG mit 10% Eisessig und 30% EtOH ausgefällt und denaturiert

-AgNO3 zugeben, Ag+ lagert sich an Protein an.

-Reduktion mit Formaldehyd zu elementarem Silber

- Winzige Mengen nachweisbar: 50 mal empfindlicher als CoomassieBB

Fluorescamin:

-Nicht Fluorescierendes Molekül das mit primären Aminen wie Lysin reagiert

-Entstehende Verbindung fluoresciert Stark unter UV-Bestrahlung

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