Molbio an der Universität Heidelberg

Karteikarten und Zusammenfassungen für Molbio an der Universität Heidelberg

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Warum verwendet man im Molekularbiologielabor nukleasefreies und
destilliertes Wasser?

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Warum werden bei enzymatischen Reaktionen die Enzyme in aller Regel erst
am Schluss zugegeben?

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Welche natürliche Funktion haben Restriktionsenzyme?

Kennen Sie alternative prokaryotische Systeme mit ähnlicher Funktion?

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Warum wird die wirtseigene DNA nicht von den Restriktionsenzymen
angegriffen?

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Wie viele Basenpaare enthält das Genom des Bakteriophagen Lambda? Wie
viele Gene?

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Warum werden Enzymmengen in „Units“ und nicht in Gramm angegeben?

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Wofür benötigt man einen Größenstandard?

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Warum wird dem Lysepuffer EDTA zugesetzt und der pH 8.0 eingestellt?

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Welche Stoffe werden durch Phenol/Chloroform extrahiert?

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Weshalb absorbieren Nukleotide bzw. Proteine UV-Licht?

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Wie hoch ist eine DNA-Lösung mit OD260 nm = 1 konzentriert?


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Welche ist die haploide Genomgröße des Menschen in Basenpaaren? Wie
viele Gene sind im menschlichen Genom codiert?

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Beispielhafte Karteikarten für Molbio an der Universität Heidelberg auf StudySmarter:

Molbio

Warum verwendet man im Molekularbiologielabor nukleasefreies und
destilliertes Wasser?

Nukleasen wie z.B. DNAsen können die transformierte DNA zerschneiden und
damit zum Misserfolg bzw. Verfälschung des Versuchs führen.


Molbio

Warum werden bei enzymatischen Reaktionen die Enzyme in aller Regel erst
am Schluss zugegeben?

Wenn das Enzym früh zugegeben wird, kann es durch die Reaktionsumgebung inaktiviert werden. Ebenfalls wird so verhindert, dass das Enzym bereits mit anderen Substanzen reagiert und damit das Ergebnis verfälscht.

Molbio

Welche natürliche Funktion haben Restriktionsenzyme?

Kennen Sie alternative prokaryotische Systeme mit ähnlicher Funktion?

Restriktionsenzyme in Bakterien erkennen und schneiden DNA an bestimmten Positionen. Sie dienen vor allem der Phagenabwehr, zusammen mit dem CRISPR/Cas-System von Prokaryoten.

Molbio

Warum wird die wirtseigene DNA nicht von den Restriktionsenzymen
angegriffen?

Restriktionsenzyme sind meist methylierungssensitiv: sie zerschneiden eine Ziel-DNA nur, wenn an bestimmten Stellen keine Methylierungen vorhanden sind. Das wirtseigene System aus Methyltransferasen und Restriktionsenzymen ist nämlich so gerichtet, dass das Methylierungsmuster die wirtseigene DNA
„schützt“.

Molbio

Wie viele Basenpaare enthält das Genom des Bakteriophagen Lambda? Wie
viele Gene?

Basenpaare: 48.502 bp
Gene: 73 protein-codierende Gene

Molbio

Warum werden Enzymmengen in „Units“ und nicht in Gramm angegeben?

Eine absolute Angabe der Enzymmenge ist nicht sinnvoll, da die Reinheit des Ansatzes oft gering ist und einige Enzyme sich auch im inaktiven bzw. partiell aktiven Zustand befinden können. Somit quantifiziert man Enzyme anhand ihrer Aktivität in „units“.

Molbio

Wofür benötigt man einen Größenstandard?

Größenstandards dienen einer absoluten Größenbestimmung von unbekannten DNA-Fragmenten: die Fragmente im Größenstandard sind in ihrer Größe bekannt und produzieren eine charakteristische Spur in der
Gelelektrophorese, sodass die Banden der unbekannten DNA damit verglichen und einer ungefähren Größe zugeordnet werden können.

Molbio

Warum wird dem Lysepuffer EDTA zugesetzt und der pH 8.0 eingestellt?

Um die Aktivität von „schädlichen“ DNAsen zu hemmen und um Zell-Zell- Verbände aufzulösen.

EDTA komplexiert zweiwertige Kationen, welche für die Funktion von DNAsen essenziell sind (Mg2+) oder Cadherin-Paare zwischen Zellen vermitteln (Ca2+).

Proteinase K baut ebenfalls DNAsen ab.
Der leicht alkalische pH durch Tris/HCl unterbindet die Aktivität von DNAsen, sodass diese von SDS denaturiert werden. Ebenfalls verhindert sie die Protonierung der negativen Phosphatreste in der DNA, sodass diese bei
der Reinigung in der wässrigen, und nicht in der organischen Phase, ausfällt.

Molbio

Welche Stoffe werden durch Phenol/Chloroform extrahiert?

Die Phenol-Chloroform-Extraktion dient der Reinigung des Zellaufschlusses.
Dabei lösen sich lipophile Bestandteile (z.B. Fette) in der unteren organischen Phenol-Phase, während Proteine sich an der Grenzschicht der
Phasen ansammeln. Die DNA löst sich in der oberen wässrigen Phase, sodass sie extrahiert werden kann.

Molbio

Weshalb absorbieren Nukleotide bzw. Proteine UV-Licht?

DNA: Elektronen des konjugierten π-Systems der Purin- und Pyrimidinbasen absorbieren Licht bei ca. 260 nm und werden dabei in ein höheres Energieniveau angehoben.


Proteine: Elektronen des konjugierten π-Systems der aromatischen Aminosäuren (Phenylalanin, Tyrosin, Tryptophan) absorbieren Licht bei ca. 280 nm und werden dabei in ein höheres Energieniveau angehoben.

Molbio

Wie hoch ist eine DNA-Lösung mit OD260 nm = 1 konzentriert?


50 µg/mL für dsDNA (33 µg/mL für ssDNA)

Molbio

Welche ist die haploide Genomgröße des Menschen in Basenpaaren? Wie
viele Gene sind im menschlichen Genom codiert?

~3.2*10^9 bp (haploid)
~20.000 protein-codierende Gene

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