Biochemie II an der Universität Halle-Wittenberg
Karteikarten und Zusammenfassungen für Biochemie II an der Universität Halle-Wittenberg
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Warum brauchen wir saubere Proteine?
- Enzym-/Proteincharakterisierung
- In vitro Experimente
- Antikörperherstellung
- Proteinstrukturaufklärung
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Proteineigenschaften
- Hydrophibizität
- IE
- Cofaktoren (z. B. ATP)
- Lokalisierung (z.B. zytoplasmatisch)
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Wie kann der Protein Abbau verhindern werden?
- Proteaseinhibitoren
- Niedrige Temperaturen
- Wohlfühlpuffer
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Reinigungsmethoden
- Affinitätschromatographi
- Anionen-/Kationenaustauscher (DEAE, MonoQ, MonoS, Hydroxylapatit)
- Gelfiltration
- Hydrophoben Interaktionschromatographie
- Größenausschlusschromatographie
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Position und Funktion von tags
- N-terminal oder C-terminal
- Erleichtert Reinigung, erhöht Stabilität, erhöht Löslichkeit
- Einfluss auf Konformation und Aktivität des Fusionsproteins
- Entfernung: Schnittstellen (PreScission, TEV)
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Was ist GST?
- GST - Glutathion-S-Transferase
- Koppel GSH an Xenobiotika und vermittelt deren Export
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Warum Expression eukaryotischer Gene in Prokaryoten?
Kostengünstiger, mehr Protein, weniger Aufwand
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Arten der Protein-Lipid-Assoziation
- Einzelne membrandurchziehende Helix, manchmal mit Fettsäureanker
- Mehrer membrandurch-spannende Helices
- Membrandurchspannende barrel
- Teilinsertierte Helix
- Fettsäure- und oligosaccharid-verankerte Proteine
- Periphere Proteine, nichtkovalent verankert über membran-durchspannende Proteine
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Einteilung von Lipiden
- Fettsäuren
- Triacylglycerole (Fette, Öle)
- Wachse (Einfach-Ester von Fettsäuren)
- Phospholipide
- Sphingolipide
- Isoprenoide (Steroide, Carotinoide etc.)
- Lipopolysaccharide
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Solubilisierung, Reinigung, Rekonstruktion von Membranproteinen
- Verwendung milder Detergenzien zur Membran-Solubilisierung (SDS, Triton X-100)
- Reinigung
- Entfernung des Detergenz, Zugabe von Phospholipiden (Rekonstruktion)
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Anionische Detergenzien
- Carboxylate R-Co2
- Sulfonate R-SO3
- Sulfate R-So4-
- Ethersufate
- Arylsulfonate
- Phosphate
- Phosphite
- Phosphonate
- Phosphinate
- Thiosulfate
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Kationische Detergenzien
- Primäre Ammoniumsalze
- Sekundäre Ammoniumsalze
- Tertiäre Ammoniumsalze
- Quarternäre Ammoniumsalze
- Pyridiniumsalze
- Salze von Amminoxiden
- Sulfoniumsalze
- Amminoxide
- Betaine
- Sulfobetaine
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