WPF3 Praktikum an der Rheinische Fachhochschule | Karteikarten & Zusammenfassungen

Lernmaterialien für WPF3 Praktikum an der Rheinische Fachhochschule

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TESTE DEIN WISSEN

Wie heißen die 3 Phasen, aus denen ein Amplifikationszyklus der PCR besteht?

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Denaturierung - Annealing - Verlängerung/Polymerisation

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Welcher Parameter/ Welche Einstellung entscheidet entscheidet darüber, welche Phase des Amplifikationszyklus durchlaufen wird?

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Temperatur 


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Welche der folgenden Komponenten enthält der „Mastermix“ in unserem Experiment und
warum wird er üblicherweise angesetzt?

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Primer, dNTPs, Taq-Pol., Reaktionspuffer, Wasser
Es gilt: es kommt alles außer Variable in MM, à bessere Vergleichbarkeit, weniger Pipettieren

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Wie hoch ist der maximale Amplifikationsgrad einer PCR mit 32 Zyklen?

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TESTE DEIN WISSEN

Aus einem Templatemolekül entstehen ~5x10^9 Amplifikationsprodukte (2^32)

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Nennen Sie 2 Gründe, warum die Reaktionskinetik der PCR in einer Plateauphase endet.

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Primer verbraucht, dNTPs verbraucht, Verhältnis Taq-Pol. Zu Matrize schlecht, Taq-Pol. verliert
Aktivität, zunehmende Anzahl Martizenmoleküle (hybridisieren)

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Worin unterscheidet sich die Negativ-Kontrolle von den anderen PCR-Ansätzen & wozu dient sie?

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Sie enthält keine DNA-Matrize. Kontrolle auf DNA-Kontamination aller anderen Komponenten

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Aus wie vielen Nukleotiden besteht ein durchschnittlicher Primer für die PCR?

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18-24nt

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Woran erkennen Sie, dass es sich beim Amplifikationsprodukt um das richtige Produkt handelt?

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An der Größe à Bestimmung durch Agarosegelelektrophorese & Vergleich mit Größenstandard

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Welche Phase der PCR ist entscheidend für die Spezifität der Primerbindung?

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Annealing

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Welche Nukleotide werden bei einer PCR benötigt?

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dATP, dCTP, dGTP, dTTP

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Wozu dient die RT-PCR?

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TESTE DEIN WISSEN

Nachweis von RNA

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Als Amplikon bezeichnet man ...

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den zur Amplifikation ausgewählten DNA Bereich

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Q:

Wie heißen die 3 Phasen, aus denen ein Amplifikationszyklus der PCR besteht?

A:

Denaturierung - Annealing - Verlängerung/Polymerisation

Q:

Welcher Parameter/ Welche Einstellung entscheidet entscheidet darüber, welche Phase des Amplifikationszyklus durchlaufen wird?

A:

Temperatur 


Q:

Welche der folgenden Komponenten enthält der „Mastermix“ in unserem Experiment und
warum wird er üblicherweise angesetzt?

A:

Primer, dNTPs, Taq-Pol., Reaktionspuffer, Wasser
Es gilt: es kommt alles außer Variable in MM, à bessere Vergleichbarkeit, weniger Pipettieren

Q:

Wie hoch ist der maximale Amplifikationsgrad einer PCR mit 32 Zyklen?

A:

Aus einem Templatemolekül entstehen ~5x10^9 Amplifikationsprodukte (2^32)

Q:

Nennen Sie 2 Gründe, warum die Reaktionskinetik der PCR in einer Plateauphase endet.

A:

Primer verbraucht, dNTPs verbraucht, Verhältnis Taq-Pol. Zu Matrize schlecht, Taq-Pol. verliert
Aktivität, zunehmende Anzahl Martizenmoleküle (hybridisieren)

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Q:

Worin unterscheidet sich die Negativ-Kontrolle von den anderen PCR-Ansätzen & wozu dient sie?

A:

Sie enthält keine DNA-Matrize. Kontrolle auf DNA-Kontamination aller anderen Komponenten

Q:

Aus wie vielen Nukleotiden besteht ein durchschnittlicher Primer für die PCR?

A:

18-24nt

Q:

Woran erkennen Sie, dass es sich beim Amplifikationsprodukt um das richtige Produkt handelt?

A:

An der Größe à Bestimmung durch Agarosegelelektrophorese & Vergleich mit Größenstandard

Q:

Welche Phase der PCR ist entscheidend für die Spezifität der Primerbindung?

A:

Annealing

Q:

Welche Nukleotide werden bei einer PCR benötigt?

A:

dATP, dCTP, dGTP, dTTP

Q:

Wozu dient die RT-PCR?

A:

Nachweis von RNA

Q:

Als Amplikon bezeichnet man ...

A:

den zur Amplifikation ausgewählten DNA Bereich

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