Bioanalytik an der Provadis School of International Management and Technology

Karteikarten und Zusammenfassungen für Bioanalytik an der Provadis School of International Management and Technology

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Was versteht man unter einem Ein-Spezies-Assay?

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Was versteht man unter einem heterogenen Assay?

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Welche Vorteile besitzen heterogene gegenüber homogenen Assays?

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Warum ergibt die Beschichtung einer ELISA-Platte mit Antigen eine bessere Adsorption wenn man die Platte schüttelt?

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Warum lässt sich ein ELISA bei 37°C schneller durchführen als bei Raumtemperatur?

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Worauf ist bei der Beschichtung mit einem Fangantikörper zu achten?

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Was versteht man unter einem ELISPOT-Assay?

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Wie werden unspezifische Bindungsstellen blockiert und welche Reagenzien verwendet man dazu?

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Wie unterscheiden sich Reaktions-und Waschvolumina?

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Welche Markerenzyme werden routinemäßig verwendet?

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Welche Eigenschaften sollten Marker-Enzyme besitzen?

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Was versteht man unter einer kinetischen Messung?

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Bioanalytik

Was versteht man unter einem Ein-Spezies-Assay?

Fang-und Nachweisantikörper stammen von derselben Spezies, bei
polyklonalen Antikörpern vom gleichen Tier

Bioanalytik

Was versteht man unter einem heterogenen Assay?

Assays, bei denen zwischen den einzelnen Reaktionen die jeweiligen
Reaktionslösungen entfernt und damit nicht an die Festphase gebundene
Reaktionspartner durch Waschschritte entfernt werden.

Bioanalytik

Welche Vorteile besitzen heterogene gegenüber homogenen Assays?

  • Weniger Störanfällig
  • Höhere Empfindlichkeit
  • Größere Auswahl an Markerenzymen

Bioanalytik

Warum ergibt die Beschichtung einer ELISA-Platte mit Antigen eine bessere Adsorption wenn man die Platte schüttelt?

Die Diffusionsstrecke wird verkürzt

Bioanalytik

Warum lässt sich ein ELISA bei 37°C schneller durchführen als bei Raumtemperatur?

Mit steigender Temperatur wird die Proteinadsorption beschleunigt

  • komplette Adsorption wird bei Raumtemperatur nach 16 h erreicht, bei 37°C nach einer 1-3 h und bei 4°C nach Übernacht - Inkubation

Bioanalytik

Worauf ist bei der Beschichtung mit einem Fangantikörper zu achten?

Bei einer zu hohen Konzentration können sich bi- oder poly-Layer bilden, die das Ergebnis verfälschen.

Bioanalytik

Was versteht man unter einem ELISPOT-Assay?

Der ELISpot Assay (Enzyme Linked Immuno Spot Assay) dient zum Nachweis sezernierter Zytokine oder Antikörper, die von einzelnen Immunzellen nach Stimulation mit Antigenen sezerniert und an einer Membran immobilisiert werden.

Bioanalytik

Wie werden unspezifische Bindungsstellen blockiert und welche Reagenzien verwendet man dazu?

  • Proteine besetzen die nicht-besetzten Bindungsstellen (z.B. Serumalbumin, Casein, heterogene Gemische effizienter)
  • Detergentien wirken so, dass sie die hydrophobe Adsorption an die Festphase verhindern und somit die Bindung von Makromolekülen (z.B. Tween, SDS, CHAPS)

Bioanalytik

Wie unterscheiden sich Reaktions-und Waschvolumina?

Waschvolumina sollte mindest doppelt so groß wie Reaktionsvolumen sein.

Bioanalytik

Welche Markerenzyme werden routinemäßig verwendet?

  • HPA - Meerrettich-Peroxidase
  • Alkalische Phosphatase
  • Beta-Galactosidase
  • Urease

Bioanalytik

Welche Eigenschaften sollten Marker-Enzyme besitzen?

  • Hohe spezifische Aktivität sowohl in freier Form als auch nach Koppelung an Immunreaktanten
  • Hohe Stabilität unter den Milieubedingungen für eine maximale Antigen-Antikörper-Reaktion
  • Anwesenheit reaktiver Gruppen für eine kovalente Bindung an den Liganden oder Analyten mit möglichst geringen Verlusten an Enzymaktivität und Immunreaktivität beim Koppelungspartner
  • Generelle Verfügbarkeit in reproduzierbarer Qualität zu niedrigen Preisen

Bioanalytik

Was versteht man unter einer kinetischen Messung?

  • Kinetische Messung durch Bestimmung der zeitlichen Änderung der Konzentration einer absorbierenden Probe. Wenn während der enzymatischen Reaktion der Absorptionsänderung eines Reaktionsteilnehmers erfolgt, kann die Reaktionsgeschwindigkeit durch Verfolgung der zeitlichen Änderung der Absorption bestimmt werden.
  • Anwendung häufig bei homogenen Assays, hohe spezifische Enzymaktivitäten und ausgeprägte Aktivitätsänderungen gewährleisten empfindliche Assays bei kurzen
    Substratreaktionszeiten

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