Testverfahren (Referate) an der LMU München

• Nachweis mutagener Substanzen
• misst mutagenes Potential verschiedener Chemikalien

• Mangelmutante des Bakteriums (Salmonella) kann Histidin nicht synthestisieren
• Auftragen der Stämme auf Histidin-Mangelnährböden
• zusätzliche Zugabe von Leberextrakt

• Mutagen führt zur Erhöhung der Rückmutation der Mangelmutante zu Histidin-synthetisierenden Bakterien
• Vergleich mit Kontrollgruppe ohne Cemikalie

PROBLEM:

viele falsch-negativ und falsch-positive Testergebnisse

• aktiviert Promutagene -> Metabolismus durch darin enthaltende Enzyme
• Bakterien haben keinen Metabolismus???
• Nachweise für Säuger (Rattenleber)
• Testergebnis 

positiv: Mutagen

nur bei Leber positiv: Promutagen

mit und ohne negativ: keine Mutagenität bei Säugern

• Nutzung verschiedener Stämme -> Spezifität
• Erhöhung der Durchlässigkeit der Bakterienwände -> Aufnahmebedingung
• Minimierung der Reparaturenzyme -> Sensitivität

Mutagenitätstest mit Bakterien

Verteilung der Chromosomen

Austausch verschiedener Chromatiden

sichtbare Chromosomenänderung

-> Mikrokerne

Gentoxische Wirkung

Nachweis von Einzel- und Doppelstrangbrüchen in einzelnen Zellen

• Chemikalien führen zu Strangbrüchen
• entnahme von Zellen und Behandlung mit Fluoreszensfarbstoffen
• einbetten in Agarose, lysiert
• Gelelektrophorese