Blockpraktikum Proteine an der Freie Universität Berlin

Karteikarten und Zusammenfassungen für Blockpraktikum Proteine an der Freie Universität Berlin

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Wovon ist die Mobilität abhängig?

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Welche Trägermaterialien gibt es?

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Was benötigt man für ein Acrylamid-Gel?

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Was ist in einem Probenpuffer enthalten?

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Aus was setzt sich eine diskontinuierliche SDS PAGE zusammen?

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Was sind Eigenschaften des Sammelgels?

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Was sind Eigenschaften des Trenngels?

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Färbemethoden

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Bestimmung des Molekulargewichts

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Wozu dient SDS?

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Wie können Disulfidbrücken gespalten werden?

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Wozu dient die Elektrophorese?

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Blockpraktikum Proteine

Wovon ist die Mobilität abhängig?

  • Molekülgröße
  • Porengröße
  • Ladung
  • angelegte Spannung
  • Pufferzusammensetzung

Blockpraktikum Proteine

Welche Trägermaterialien gibt es?

  • Agarose 
  • vernetztes Polyacrylamid (chem. inert, stabil, Porengröße abhängig von Konzentration)

Blockpraktikum Proteine

Was benötigt man für ein Acrylamid-Gel?

  • Acrylamid = Gelbildner
  • Ammoniumpersulfat (APS) = Radikalstarter
  • Methylen-bisacrylamid = Quervernetzer
  • Tetramethylethyldiamin (TEMED) = Katalysator

Blockpraktikum Proteine

Was ist in einem Probenpuffer enthalten?

  • Tris/HCl (pH 6,8) = Puffer
  • Saccharose (10%) = beschwert Proben
  • Bromphenolblau = Laufmittelfront
  • SDS (2%) = Denaturierung + negative Ladung
  • DTT (0,25M) = Reduktion von Disulfidbrücken

Blockpraktikum Proteine

Aus was setzt sich eine diskontinuierliche SDS PAGE zusammen?

Aus Sammel- und Trenngel.


Blockpraktikum Proteine

Was sind Eigenschaften des Sammelgels?

  • große Poren
  • geringe Acrylamidkonzentration
  • Puffer -> Glycin + Cl-Ionen
  • pH 6,8


Proteine sortieren sich nach Mobilität, wandern aber mit gleicher Geschwindigkeit

Blockpraktikum Proteine

Was sind Eigenschaften des Trenngels?

  • engporig
  • hohe Acrylamidkonzentration
  • pH 8,8
  • Glycin + Cl- laufen vorweg 
  • Auftrennung nach Größe

Blockpraktikum Proteine

Färbemethoden

  • Coomassie Brilliant Blue (einfach, billig, ungiftig)
  • Silberfärbung (sensitiver)

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Bestimmung des Molekulargewichts

zurückgelegte Strecke ist proportional zum Logarithmus des Molekulargewichts


rel. Mobilität = Weg(Prot)/Weg(Marker)

Blockpraktikum Proteine

Wozu dient SDS?

  • lagert sich proportional zum Größe des Proteins an 
  • überdeckt Eigenladung des Proteins
  • Denaturierung, jedoch keine Spaltung von Disulfidbrücken

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Wie können Disulfidbrücken gespalten werden?

Mit beta-Mercaptoethanol oder DTT.

Blockpraktikum Proteine

Wozu dient die Elektrophorese?

Zur Auftrennung von Makromolekülen.

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