Molekularbiologische Und Biophysikalische Methoden an der Fachhochschule Campus Wien

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Welche Vor und Nachteile bringt ein Zweistufiges Nachweissystem mit Antikörpern?

+
- stärkeres Signal
- günstiger
-
- eventuelle Kreuzkontaminationen
- höheres Hintergrundsignal
- längere Dauer

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Was versteht man unter ELISA und welche 3 Gruppen kennen Sie?

Enzyme Linked Immunsorbent Assay - ist ein Antikörperbasiertes Nachweisverfahren

Sandwich ELISA
Antibody Capture Assay
Competitive ELISA

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Welche Enzyme stellen sich bei der RNA Isolierung als besonders problematisch dar?

RNAsen (Ribonukleasen)

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Auf welchem Prinzip basiert die Methode der Anionenaustauschersäule?

Separation anhand der Ladung - negativ geladene DNA bindet an positiv geladene Gruppen der stationären Phase

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Welche Rolle spielt Phenol bei der Aufreinigung von Nukleinsäuren bei der Phenolextraktion?

Phenol ist in der Lage Proteine und Lipide zu lösen, Proteine werden denaturiert. Dadurch können diese von Nukleinsäuren getrennt werden

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Wie kann der ungefähre Fortschritt einer Gelelektrophorese beobachtet werden?

durch Beobachtung der Bromphenolblau Lauffront

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Auf welchem Membrantypen wird beim Southern Blot geblottet?

Nitrozellulose & Nylonfilter

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Spektrometrie: Bei welchen Wellenlängen können Proteine und Nukleinsäuren detektiert werden?

Nukleinsäuren: 260 nm

Proteine: 280 nm

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Nennen Sie 3 Arten der Verwendung von Oligonukleotiden. Beschreiben Sie kurz nach welchem Prinzip diese Arten funktionieren.

PCR: Oligos mit 20-35 bp als Primer
RNAi: Antisenseoligonukleotide für RNA Interferenz
Sonden: In Situ- Hybridisierung zum Nachweis in Zellen, Nick Translation

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Wie kann man die Schmelztemperatur von Oligonukleotiden näherungsweise berechnen? (Formel) Nennen Sie 3 Größen, die einen Einfluss auf die Schmelztemperatur haben.

Wallace- Regel: Tm = 4* (G+C) + 2* (A+T)

Einflussgrößen:

Basenzusammensetzung
Inkubationszeit
Länge der Nukleotide
chemische Natur der gebildeten Hybride
Anteil falscher Basenpaarungen
Salzkonzentration der Lösung
Zusatz bestimmter adjuvanter Chemikalien

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Welche 3 Schritte gibt es bei der PCR? Beschreiben Sie diese (Temperatur, was passiert)

Denaturierung
- Auftrennen des Doppelstranges
- 95°C - 15-30 sec
Annealing
- spezifische Anlagerung der Primer - sequenzabhängig
- 50-65°C (4-5° unter Schmelztemperatur) 10-30 sec
Elongation
- Synthese des neuen Stranges
- 72°C - 1000bp / min

Diese 3 Schritte beschreiben einen Zyklus der 25-35 mal wiederholt wird

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Wie unterscheiden sich polyklonale von monoklonalen Antikörpern hinsichtlich deren Interaktion mit dem Antigen?

polyklonale Antikörper sind gegen verschiedene Epitope auf dem Antigen gerichtet , monoklonale Antikörper nur gegen ein einziges Epitop - deswegen sind monoklonale Antikörper spezifischer als polyklonale AK

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