DNA-Analyse an der Fachhochschule Campus Wien

Karteikarten und Zusammenfassungen für DNA-Analyse an der Fachhochschule Campus Wien

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Puc 18 / puc19

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pBR322

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Klonierung durch Insertionsinaktivierung
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Rekombinante DNA=

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Definition biotechnologie
(Fragt er wsh eh ned 🤷‍♂️)

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Isoschizomere

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Multiple Cloning Site / SCS (Polylinker)
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Begriffe zum Klonieren

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Plasmide vs. Vektor

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Typ II - Restriktionsenzyme

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Eco R1
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DNA-Analyse

Puc 18 / puc19
Sind künstliche bakterielle Plasmide

Zählen zu den häufigsten Plasmiden in Ecoli

Vorteil = besonders hohe Anzahl an Kopien pro Bakterium (high copy number Plasmid) - große Anzahl an Plasmiden kann isoliert werden

Derivate des pBR322 Plasmides 
Sind mit 2686 bp relativ klein
Transkription gezielt eingeleitet werden über IPTG - IPTG schaltet Promotor von LAC-Z Operon gezielt ein/aus - über den Promotor wird die Transkription des eingebauten Fremd-DNA-Moleküls ebenfalls ein/ausgeschalten

pUC besitzt ampR (Antibiotikaresistenz) dient zur Selektion von pUC positiven Bakterien nach einfügen des Plasmides in Bakterien 

pUC 18 /19 unterscheiden sich lediglich in der inversen Orientierung der MCS 

DNA-Analyse

pBR322
Ist ein primitiver Klonierungsvektor (2 Resistenzen kein LAC-Z)

Enthält Gene für Resitenzen gegen Ampicillin und Tetracyclin (ampr/tetr)

Singuläre Restriktionsschnittstellen in den Resistenzgenen 

DNA-Analyse

Klonierung durch Insertionsinaktivierung
Früheste Form der Klonierung

Wird heute nur für spezialanwendungen verwendet 

Beschreibt die primitiver Vektor klonierunh (also 2 AR wobei in eine Fremdgen eingebracht - anschließend mit AB überprüft und in 2. Petrischale selektiert)

DNA-Analyse

Rekombinante DNA=
DNA die auch ein Fremdgen integriert hat (sind Plasmide - also in Plasmid wird gewünschte DNA integriert)

Bei Pflanzen schwierig "Produkt" zu extrahieren - weil komplexe/mehrschichtige Zellwand 

DNA-Analyse

Definition biotechnologie
(Fragt er wsh eh ned 🤷‍♂️)
Nutzung lebender Organismen od ihrer Produkte zum Vorteil des Menschen zur Herstellung eines Produktes oder zur Lösung eins Problemes

"Biotechnologie ist die integrierte Anwendung von Biochemie, Mikrobiologie und Verfahrenstechnik mit dem ziel, eine technische Anwendung des Potenzials von Mikroorganismen, Zell- und Gewebekulturen zu erreichen" (europ. Föderation f Biotechnologie)

DNA-Analyse

Isoschizomere

Isoschizomere sind Paare von Restriktionsenzymen, welche gleiche Erkennungssequenzen erkennen.
z. B. Sau3AI /GATC und DpnII /GATC


Das erst-gefundene Enzym wird als Prototyp bezeichnet, alle nachfolgenden Enzyme die die gleiche Sequenz erkennen und schneiden werden dann als Isoschizomere des Prototyps bezeichnet.
Isoschizomere sind in der Regel aus verschiedenen Bakterienstämmen isoliert worden und können daher unterschiedliche Reaktionsbedinungen erfordern.

DNA-Analyse

Multiple Cloning Site / SCS (Polylinker)
Kurze DNA-Sequenz die viele Restriktionsschnittstellen beherbergt - innerhalb eines Plasmides einzihartig - hier wird Fremd-DNA eingebaut

DNA-Analyse

Begriffe zum Klonieren

• „cloning“: Verdoppelung, d.h. darunter versteht man die Isolierung und Verdoppelung bzw. Vervielfältigung von DNA mittels rekombinanter DNA-Technologie (auf deutsch klonieren)
• „molecular cloning“: Isolierung von einzelnen
Genen bzw. DNA-Stücken (auf deutsch klonieren)
• „cloning“: die Erzeugung eines oder mehrerer genetisch identischer Individuen von Lebewesen
(Auf deutsch. klonen)

DNA-Analyse

Plasmide vs. Vektor

• Der Hauptunterschied zwischen einem Plasmid und einem Vektor besteht darin, dass ein Plasmid ein extrachromosomales Element von hauptsächlich bakteriellen Zellen (auch eukaryontischen Hefen) ist, während ein Vektor ein Vehikel ist, das fremde DNA-Moleküle in eineandere Zelle befördert.


• Plasmide können auch als Vektoren verwendet werden.


• Cosmide, virale Vektoren und künstliche Chromosomen sind andere Vektortypen.
• Im Allgemeinen sind Plasmide und Vektoren selbstreplizierende Moleküle in der Zelle.


• Vektoren werden hauptsächlich in der rekombinanten DNA-Technologie verwendet, um fremde DNA-Moleküle in Zellen einzuführen.

DNA-Analyse

Typ II - Restriktionsenzyme

• Bei den Typ II Restriktionsenzymen liegt die Schnittstelle in der Erkennungsstelle der Sequenz (ds DNA).
• Restriktionsenzyme verbrauchen kein ATP
• Die Erkennungssequenz haben eine 2-fache Symmetrieachse -> Palindrom (von vorne/hinten gleich gelesen)
- Ein Esel lese nie.
- Nette Pipetten

- Spart Raps!
• Die Restriktionsenzyme schaffen „sticky überhängende“ oder „bluntglatte“ Enden.

Enzyme mit versetzten Schnitten -> überhängende, komplementäre Enden (auch sticky ends oder klebrige Enden genannt)

• Enzyme die bei Stränge an der gleichen Position schneiden -> glatte Enden (auch blunt ends genannt).

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Eco R1
Schneidet Fremd-DNA und Plasmid auf (ist ein Restriktionsenzym) daher schneidet es beides an der selben Erkennungssequenz - daher lässt sich die Fremd-DNA an dieser Stelle einfügen 
- sticky end cut

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Verktor Definition 
Vektor übertragungsform vom Fremd-DNA zur vervielfältigung
ZB ein Plasmid mit gewünschter DNA-Sequenz über Horizontalen Gen-Transfer in Bakterien

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