ZKT tierische Zellkulturen at ZHAW - Zürcher Hochschule für Angewandte Wissenschaften

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Adhäsionsverbindungen

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Worauf muss man beim Passagieren von Zellen achten?

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Welche Mediumtiefe sollte für die Kultivierung der Zellen in statischen Kultvierungssystemen eingehalten werden?


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Was sind Vor- und Nachteile von FCS/FBS ? 

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Was bedeutet ein gelbes Medium? Was ein Lila Medium?

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Welcher Stoff deckt in Gegenwart von Glucose 30-65% des Energiebedarfs der Zelle? Was sind Alternativen?

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Wie sind die Oberflächen von TFlasks behandelt?

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Wie berechnet man den Mediumverbrauch pro T Flasche?

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Was ist unterschied zwischen Integrin und Cadherin?

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Beschreiben Sie den Einfrier-Prozess genau!

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Mit welcher Chemikalie wird im Praktikumsversuch Apoptosenachweis die Apoptose ausgelöst?

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In welcher/n Phase/n der Mitose findet die Dekondensierung der Chromatiden statt?

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ZKT tierische Zellkulturen

Adhäsionsverbindungen

werden durch homophile Bindungen von Cadherinen stabilisiert

ZKT tierische Zellkulturen

Worauf muss man beim Passagieren von Zellen achten?

1) Vorgewärmtes Medium verwenden

2) Zellen nicht zu lange mit Trypsin behandeln

3) Es sollten Einzelzellen und keine Zellklumpen eingesät werden

ZKT tierische Zellkulturen

Welche Mediumtiefe sollte für die Kultivierung der Zellen in statischen Kultvierungssystemen eingehalten werden?


 0.2 - 0.5cm

ZKT tierische Zellkulturen

Was sind Vor- und Nachteile von FCS/FBS ? 

Pro: 

- Spurenelemente, Vitamine und Wachstums- und Adhäsionsfaktoren für Wachstum

- Antiproteasen


Contra:

- Viren, BSE

- Immunreaktionen

- Chargenvariabilität

- Ethische Aspekte (Rinderfeten Blut ausgequetscht)

- Schaumbildung, Proteinaufarbeitung


ZKT tierische Zellkulturen

Was bedeutet ein gelbes Medium? Was ein Lila Medium?

gelb: Kultur überwachsen, Bakterielle Kontamination, zu viel CO2


lila: Kultur wächst nicht, Kontamination mit Hefen oder Pilzen, Zu wenig CO2 im Inkubator 


ideal: orange

ZKT tierische Zellkulturen

Welcher Stoff deckt in Gegenwart von Glucose 30-65% des Energiebedarfs der Zelle? Was sind Alternativen?

Glutamin mit dem Glutaminolyse

pro Mol Glutamin = 2 mol Ammonium freigesetzt -> Abbauprodukte behindern Zellwachstum und Vitalität


Energiegewinn = 27 ATP



(Lactat: Senkt pH

Ammonium: tödlich)


Alternative? glutaminhaltige Dipeptide

ZKT tierische Zellkulturen

Wie sind die Oberflächen von TFlasks behandelt?

hydrophil, polar oder negativ geladene funktionelle Gruppen


Nachteil: teuer, Umweltbelastung

ZKT tierische Zellkulturen

Wie berechnet man den Mediumverbrauch pro T Flasche?

T25:

min: 0.2cm * 25cm^2 = 5cm^3 -> 5mL

max: 0.5*25 = 12.5mL


T75:

0.2 -> 15mL

0.5 -> 37.5 mL

ZKT tierische Zellkulturen

Was ist unterschied zwischen Integrin und Cadherin?

Cadherin: transmembrane Glykoproteine, stabilisieren Zell-Zellkontakte


Integrin: Rezeptorproteine die Zellen mit ECM verbinden. 

ZKT tierische Zellkulturen

Beschreiben Sie den Einfrier-Prozess genau!

Phase 1:Zelle befindet sich im physiologische Temperaturbereich zwischen 37°C und Raumtemperatur 

Phase 2: +20°C und -2°C 

- Funktionsfähigkeit der Zelle bereits deutlich eingeschränkt: Verlangsamung oder «Abschaltung» von Stoffwechselphysiologischen  Prozessen

Phase 3: -2°C und -5°C 

- Extrazelluläre Eisbildung beginnt 

- Osmotische Effekte (Dehydrierung der Zelle, Schrumpfen der Zelle)

Phase 4: -15°C und -25°C 

- Intrazelluläre Eisbildung setzt ein

- Fixierung der cytopl. Komponenten an ihrem jeweiligen Ort

- Zugabe der Gefrierschutzmittel sorgt für viele kleine Eiskristalle 

- Mechanischer Stress durch Volumenzunahme des gebildeten Eises

- Elektrolytgradienten entstehen Phase 5: -25°C und -130°C 

- Wachstum grosser Eisbildung 

Phase 6: Unterhalb von -130°C

- Alle beschriebenen Prozesse kommen zum erliegen

ZKT tierische Zellkulturen

Mit welcher Chemikalie wird im Praktikumsversuch Apoptosenachweis die Apoptose ausgelöst?

Staurosporin

ZKT tierische Zellkulturen

In welcher/n Phase/n der Mitose findet die Dekondensierung der Chromatiden statt?

Telophase

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