ZKT tierische Zellkulturen at ZHAW - Zürcher Hochschule für Angewandte Wissenschaften

werden durch homophile Bindungen von Cadherinen stabilisiert

1) Vorgewärmtes Medium verwenden

2) Zellen nicht zu lange mit Trypsin behandeln

3) Es sollten Einzelzellen und keine Zellklumpen eingesät werden

 0.2 - 0.5cm

Pro: 

- Spurenelemente, Vitamine und Wachstums- und Adhäsionsfaktoren für Wachstum

- Antiproteasen

Contra:

- Viren, BSE

- Immunreaktionen

- Chargenvariabilität

- Ethische Aspekte (Rinderfeten Blut ausgequetscht)

- Schaumbildung, Proteinaufarbeitung

gelb: Kultur überwachsen, Bakterielle Kontamination, zu viel CO2

lila: Kultur wächst nicht, Kontamination mit Hefen oder Pilzen, Zu wenig CO2 im Inkubator 

ideal: orange

Glutamin mit dem Glutaminolyse

pro Mol Glutamin = 2 mol Ammonium freigesetzt -> Abbauprodukte behindern Zellwachstum und Vitalität

Energiegewinn = 27 ATP

(Lactat: Senkt pH

Ammonium: tödlich)

Alternative? glutaminhaltige Dipeptide

hydrophil, polar oder negativ geladene funktionelle Gruppen

Nachteil: teuer, Umweltbelastung

T25:

min: 0.2cm * 25cm^2 = 5cm^3 -> 5mL

max: 0.5*25 = 12.5mL

T75:

0.2 -> 15mL

0.5 -> 37.5 mL

Cadherin: transmembrane Glykoproteine, stabilisieren Zell-Zellkontakte

Integrin: Rezeptorproteine die Zellen mit ECM verbinden. 

Phase 1:Zelle befindet sich im physiologische Temperaturbereich zwischen 37°C und Raumtemperatur 

Phase 2: +20°C und -2°C 

- Funktionsfähigkeit der Zelle bereits deutlich eingeschränkt: Verlangsamung oder «Abschaltung» von Stoffwechselphysiologischen  Prozessen

Phase 3: -2°C und -5°C 

- Extrazelluläre Eisbildung beginnt 

- Osmotische Effekte (Dehydrierung der Zelle, Schrumpfen der Zelle)

Phase 4: -15°C und -25°C 

- Intrazelluläre Eisbildung setzt ein

- Fixierung der cytopl. Komponenten an ihrem jeweiligen Ort

- Zugabe der Gefrierschutzmittel sorgt für viele kleine Eiskristalle 

- Mechanischer Stress durch Volumenzunahme des gebildeten Eises

- Elektrolytgradienten entstehen Phase 5: -25°C und -130°C 

- Wachstum grosser Eisbildung 

Phase 6: Unterhalb von -130°C

- Alle beschriebenen Prozesse kommen zum erliegen

Staurosporin

Telophase