Lernmaterialien für Técnicas de bioquímica y biología molecular an der Universitat Rovira I Virgili Tarragona

Greife auf kostenlose Karteikarten, Zusammenfassungen, Übungsaufgaben und Altklausuren für deinen Técnicas de bioquímica y biología molecular Kurs an der Universitat Rovira I Virgili Tarragona zu.

TESTE DEIN WISSEN

¿Quin es el fonament de la centrifugació?

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Aplicar una força superior a la gravetat terrestre per accelerar la velocitat de sedimentació

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Indica y explica el dos tipus de centrifugació per gradient de densitat

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Zonal

La densitat de les partícules que s’han de separar és superior que la densitat del solvent.

Mostra damunt gradient preformat + força centrífuga: les partícules sedimenten a través del gradient, movent-se a velocitat diferent segons la seva mida/massa.

S’ha d’ajustar el temps de centrifugació, si s’excedeix, pot arribar a precipitar tot!!

Procediment:

Tub emplenat amb un líquid inert de densitat variable- hi ha un gradient preformat dins el tub
La mostra es diposita a sobre del líquid en la part superior del tub.
El gradient esdevé inalterat per la centrifugació
Amb la centrifugació, les partícules que sedimenten abans avancen les que ho fan lentament
La mostra es separa en bandes dins el gradient
Preferentment s’usen rotors basculants

Isopícnica o isodensitat

La densitat de les partícules que s’han separar és similar a la densitat del solvent formador de gradient.

Mostra dissolta en una solució isocràtica + força centrífuga: el solut que forma el gradient es distribueix pel tub de la centrífuga, i simultàniament també ho fan les diferents partícules de la mostra en funció de la seva densitat

Procediment:

La mostra es diposita junt amb una substància formadora de gradient: a la part superior o barrejada amb ell.
Les partícules es mouen a un punt on la seva densitat de flotació iguala la densitat del fluid que forma les bandes.
El procés arriba a l’equilibri quan les densitat de les particules s’igualen amb les del fluid del gradient i això és en funció de la densitat de flotació i no de les velocitats.
Ex: gradients de ClCs i NaI per macromolecules i nts

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Posa un exemple de us d'isotops

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

El contingut d’aigua corporal es pot estimar mesurant la dil.lució d’aigua deuterada a l’organisme. Animals d’experimentació i humans.
L’ús d’aigua doblement marcada amb deuteri i oxigen 18 serveix per estimar la despesa energètica en humans obesos. L’oxigen de l’aigua surt en forma de CO2 expirat quan s’han cremat els sucres totalment.
S’ha aplicat en l’estudi de metabolopatíes congènites:

Activitat fenilalanina hidroxilasa s’ha estudiat administrant fenilalanina

13C→ PKU.

El reciclatge de glucosa i la gluconeogènesi en pacients amb glicogenosis de tipus I i III s’estudia amb 14C glucosa.

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Indica de que está compost el medi de perfusió per cultius

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

O2. Quantitat suficient
nutrients i substrats: glucosa, lacta, aas, proteïnes,vitamines…
electròlits i proteïnes. Potencial osmòtic i col.loidal: BSA
pH i capacitat tamponadora: bicarbonat (sol. Ringer-Krebs)
Anticoagulants: heparina, EDTA, citrat
antibiòtics: ampli espectre i toxicitat mínima

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Quins tipus de cultius cel·lulars hi ha?

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Cultius primaris (mortals) siguin d’òrgans teixits o cèl·lules i cultius de línies cel·lulars establertes (immortals)

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Característiques d'un cultiu primari

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Consisteixen en cèl·lules normal, teixits u òrgans que s’han escindit directament de l’organisme viu ( animal o humà) o per biòpsia.
Tenen l’avantatge de que són models de la funció natural del la cèl·lula teixit u òrgan dins de l’organisme. Però el seu cultiu perllongat porta a la senescència (50‐100 generacions màxim) i degeneració cromosòmica I funcional i finalment a la mort -> són cultius de vida finita. Arriba un punt que deixen de dividir i entren en senescència.

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Perquè serveix el gruix dels talls del teixit i quina es la mida adequada per tallar?

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Determina principalment la velocitat de difusió de gasos i metabòlits
0.5-5 mm amb proporció cels trencades/intactes mínima

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Avantatges i desavantatges del treball amb cultius cel·lulars

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Avantatges:

molt proper “in vivo”:
- arquitectura teixit
- ruta fisiològica
No interaccions entre órgans
Millor control

Desavantatges:

Dificultat perfusió correcta
Heterogeneïtat tissular
Variabilitat individual= animal
Pèrdua control hormonal i nerviós

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Indica les condicions a la que s'ha de trobar un medi de cultiu per a trossos de teixit

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

En aigua milliQ o purificada amb filtre de carbó actiu.
- El medi final contindrà macro i micronutrients, tampó, antibiòtic i suplements 1x DMEM, 4.2 mM NaHCO3, 10 mM HEPES (tampons), 25 U/ mL penicil·lina, 25 U/ mL estreptomicina ( antibiòtics) I 19 mM D‐glucosa (sucres).

Mantenir pH a 7.2
Comprovar osmolaritat amb H2O
Mantenir en fred 4°C i protegir de la llum. Usar‐lo en 3 setmanes.

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

De que depèn l'èxit de l'homogeneïtzació?

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Teixit de partida
Les característiques físico-químiques de la solució usada
El mètode de disrupcció cel.lular

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Anomena els productes que componen el medi d'homogeneïtzació

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Solució salina equilibrada per mantenir el pH i l'equilibri iònic (tampó Tris o fosfat)
1. força iònica entre 0.1 i 0.2 M
2. pH entre 7 i 8
Agents que mantinguin el potencial osmòtic:
1. Sacarosa, manitol o sorbitol
Agents amb finalitats específiques
1. Agents quelants com EDTA i EGTA.
2. Inhibidors enzimàtics (+ 4ºC): inhibidors de proteases:.
  - Serina proteases: DFP( di-isopropylphosphofluoridate), PMSF (fenilmetilsulfonilfluoride) i TPCK( tosilfenilalanil-clorometilketone).
  - Per grups sulfidril: N-ethylmaleimide, iodoacetat i cystatin
  - Aspartic proteases: pepstatina
  - Inhibidors de metalloproteases: EDTA i 1,10-fenanthrolina
  - Inhibidors d'exopeptidases: amastatina i bestatina
3. Agents antioxidants:
  - 2-mercaptoetanol, dithiothreitol, glutatio reduiït o cysteina a concentración entorn 30 mM.
4. Polivinilpirrolidona : eliminar els compostos fenòlics per filtració.
5. Sovint és més adequat usar un medi aqüós orgànic que un salí.
  - Citrat -> inactivar desoxirribonucleases neutres;
  - el glicerol, l'etilenglicol o els seus polímers -> preparacions de plastidis
6. Antibacterians i/o fungicides a baixes concentracions : azida sòdica
7. Detergents: finalitats poden ser diverses
  - sodium dodecilsulfate (SDS), sodium deoxycholate, cetyl trimethylammonium bromide (CTAB) i CHAPS i detergents no iònics com Tritó X-100 i Nonidet P-40.

Lösung ausblenden

TESTE DEIN WISSEN

Característiques de cultius de línies cel·lulars establertes

Lösung anzeigen

TESTE DEIN WISSEN

Es poden perpetuar il·limitadament.
S’obtenen de biòpsies tumorals humanes o animals o son immortalitzades al laboratori.
- Mètodes: Físics (radiacions ionitzants), químics ( agents cancerosos), biològics ( retrovirus oncogènics o fusió cel·lular amb cèl·lules immortals).
També poden degenerar amb el temps però poden tenir moltes més divisions cel·lulars I tenen característiques diferents.
Autenticar les cèl·lules serveix per comprovar que la línia cel·lular que tenim és la que creiem. Es fa mitjançant perfils enzimàtics i/o marcadors de superfície i/o test genètics.

Lösung ausblenden

3349 Karteikarten
589 Studierende
14 Lernmaterialien

Jetzt loslegen

Beispielhafte Karteikarten für deinen Técnicas de bioquímica y biología molecular Kurs an der Universitat Rovira I Virgili Tarragona - von Kommilitonen auf StudySmarter erstellt!

¿Quin es el fonament de la centrifugació?

Aplicar una força superior a la gravetat terrestre per accelerar la velocitat de sedimentació

Indica y explica el dos tipus de centrifugació per gradient de densitat

Zonal

La densitat de les partícules que s’han de separar és superior que la densitat del solvent.

Mostra damunt gradient preformat + força centrífuga: les partícules sedimenten a través del gradient, movent-se a velocitat diferent segons la seva mida/massa.

S’ha d’ajustar el temps de centrifugació, si s’excedeix, pot arribar a precipitar tot!!

Procediment:

Tub emplenat amb un líquid inert de densitat variable- hi ha un gradient preformat dins el tub
La mostra es diposita a sobre del líquid en la part superior del tub.
El gradient esdevé inalterat per la centrifugació
Amb la centrifugació, les partícules que sedimenten abans avancen les que ho fan lentament
La mostra es separa en bandes dins el gradient
Preferentment s’usen rotors basculants

Isopícnica o isodensitat

La densitat de les partícules que s’han separar és similar a la densitat del solvent formador de gradient.

Procediment:

La mostra es diposita junt amb una substància formadora de gradient: a la part superior o barrejada amb ell.
Les partícules es mouen a un punt on la seva densitat de flotació iguala la densitat del fluid que forma les bandes.
El procés arriba a l’equilibri quan les densitat de les particules s’igualen amb les del fluid del gradient i això és en funció de la densitat de flotació i no de les velocitats.
Ex: gradients de ClCs i NaI per macromolecules i nts

Posa un exemple de us d'isotops

El contingut d’aigua corporal es pot estimar mesurant la dil.lució d’aigua deuterada a l’organisme. Animals d’experimentació i humans.
L’ús d’aigua doblement marcada amb deuteri i oxigen 18 serveix per estimar la despesa energètica en humans obesos. L’oxigen de l’aigua surt en forma de CO2 expirat quan s’han cremat els sucres totalment.
S’ha aplicat en l’estudi de metabolopatíes congènites:

Activitat fenilalanina hidroxilasa s’ha estudiat administrant fenilalanina

13C→ PKU.

El reciclatge de glucosa i la gluconeogènesi en pacients amb glicogenosis de tipus I i III s’estudia amb 14C glucosa.

Indica de que está compost el medi de perfusió per cultius

O2. Quantitat suficient
nutrients i substrats: glucosa, lacta, aas, proteïnes,vitamines…
electròlits i proteïnes. Potencial osmòtic i col.loidal: BSA
pH i capacitat tamponadora: bicarbonat (sol. Ringer-Krebs)
Anticoagulants: heparina, EDTA, citrat
antibiòtics: ampli espectre i toxicitat mínima

Quins tipus de cultius cel·lulars hi ha?

Cultius primaris (mortals) siguin d’òrgans teixits o cèl·lules i cultius de línies cel·lulars establertes (immortals)

Mehr Karteikarten anzeigen

Característiques d'un cultiu primari

Consisteixen en cèl·lules normal, teixits u òrgans que s’han escindit directament de l’organisme viu ( animal o humà) o per biòpsia.
Tenen l’avantatge de que són models de la funció natural del la cèl·lula teixit u òrgan dins de l’organisme. Però el seu cultiu perllongat porta a la senescència (50‐100 generacions màxim) i degeneració cromosòmica I funcional i finalment a la mort -> són cultius de vida finita. Arriba un punt que deixen de dividir i entren en senescència.

Perquè serveix el gruix dels talls del teixit i quina es la mida adequada per tallar?

Determina principalment la velocitat de difusió de gasos i metabòlits
0.5-5 mm amb proporció cels trencades/intactes mínima

Avantatges i desavantatges del treball amb cultius cel·lulars

Avantatges:

molt proper “in vivo”:
- arquitectura teixit
- ruta fisiològica
No interaccions entre órgans
Millor control

Desavantatges:

Dificultat perfusió correcta
Heterogeneïtat tissular
Variabilitat individual= animal
Pèrdua control hormonal i nerviós

Indica les condicions a la que s'ha de trobar un medi de cultiu per a trossos de teixit

En aigua milliQ o purificada amb filtre de carbó actiu.
- El medi final contindrà macro i micronutrients, tampó, antibiòtic i suplements 1x DMEM, 4.2 mM NaHCO3, 10 mM HEPES (tampons), 25 U/ mL penicil·lina, 25 U/ mL estreptomicina ( antibiòtics) I 19 mM D‐glucosa (sucres).

Mantenir pH a 7.2
Comprovar osmolaritat amb H2O
Mantenir en fred 4°C i protegir de la llum. Usar‐lo en 3 setmanes.

De que depèn l'èxit de l'homogeneïtzació?

Teixit de partida
Les característiques físico-químiques de la solució usada
El mètode de disrupcció cel.lular

Anomena els productes que componen el medi d'homogeneïtzació

Solució salina equilibrada per mantenir el pH i l'equilibri iònic (tampó Tris o fosfat)
1. força iònica entre 0.1 i 0.2 M
2. pH entre 7 i 8
Agents que mantinguin el potencial osmòtic:
1. Sacarosa, manitol o sorbitol
Agents amb finalitats específiques
1. Agents quelants com EDTA i EGTA.
2. Inhibidors enzimàtics (+ 4ºC): inhibidors de proteases:.
  - Serina proteases: DFP( di-isopropylphosphofluoridate), PMSF (fenilmetilsulfonilfluoride) i TPCK( tosilfenilalanil-clorometilketone).
  - Per grups sulfidril: N-ethylmaleimide, iodoacetat i cystatin
  - Aspartic proteases: pepstatina
  - Inhibidors de metalloproteases: EDTA i 1,10-fenanthrolina
  - Inhibidors d'exopeptidases: amastatina i bestatina
3. Agents antioxidants:
  - 2-mercaptoetanol, dithiothreitol, glutatio reduiït o cysteina a concentración entorn 30 mM.
4. Polivinilpirrolidona : eliminar els compostos fenòlics per filtració.
5. Sovint és més adequat usar un medi aqüós orgànic que un salí.
  - Citrat -> inactivar desoxirribonucleases neutres;
  - el glicerol, l'etilenglicol o els seus polímers -> preparacions de plastidis
6. Antibacterians i/o fungicides a baixes concentracions : azida sòdica
7. Detergents: finalitats poden ser diverses
  - sodium dodecilsulfate (SDS), sodium deoxycholate, cetyl trimethylammonium bromide (CTAB) i CHAPS i detergents no iònics com Tritó X-100 i Nonidet P-40.

Característiques de cultius de línies cel·lulars establertes

Es poden perpetuar il·limitadament.
S’obtenen de biòpsies tumorals humanes o animals o son immortalitzades al laboratori.
- Mètodes: Físics (radiacions ionitzants), químics ( agents cancerosos), biològics ( retrovirus oncogènics o fusió cel·lular amb cèl·lules immortals).
També poden degenerar amb el temps però poden tenir moltes més divisions cel·lulars I tenen característiques diferents.
Autenticar les cèl·lules serveix per comprovar que la línia cel·lular que tenim és la que creiem. Es fa mitjançant perfils enzimàtics i/o marcadors de superfície i/o test genètics.

Técnicas de bioquímica y biología molecular

Erstelle und finde Lernmaterialien auf StudySmarter.

Greife kostenlos auf tausende geteilte Karteikarten, Zusammenfassungen, Altklausuren und mehr zu.

Jetzt loslegen

Select your language

Lernmaterialien für Técnicas de bioquímica y biología molecular an der Universitat Rovira I Virgili Tarragona

Beispielhafte Karteikarten für deinen Técnicas de bioquímica y biología molecular Kurs an der Universitat Rovira I Virgili Tarragona - von Kommilitonen auf StudySmarter erstellt!

Erstelle und finde Lernmaterialien auf StudySmarter.

Das sind die beliebtesten Técnicas de bioquímica y biología molecular Kurse im gesamten StudySmarter Universum

Bioquímica y Biología celular

Bioquímica y biología molecular

Bioquímica molecular

Bioquímica molecular

biología molecular

Die all-in-one Lernapp für Studierende

Greife auf Millionen geteilter Lernmaterialien der StudySmarter Community zu

Erstelle Karteikarten und Zusammenfassungen mit den StudySmarter Tools