Biochemie II at Universität Halle-Wittenberg

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Warum brauchen wir saubere Proteine? 

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Proteineigenschaften

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Wie kann der Protein Abbau verhindern werden? 

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Reinigungsmethoden

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Position und Funktion von tags

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Was ist GST? 

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Warum Expression eukaryotischer Gene in Prokaryoten? 

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Arten der Protein-Lipid-Assoziation

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Einteilung von Lipiden

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Solubilisierung, Reinigung, Rekonstruktion von Membranproteinen

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Anionische Detergenzien

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Kationische Detergenzien 

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Biochemie II

Warum brauchen wir saubere Proteine? 
  • Enzym-/Proteincharakterisierung
  • In vitro Experimente
  • Antikörperherstellung
  • Proteinstrukturaufklärung

Biochemie II

Proteineigenschaften
  • Hydrophibizität
  • IE
  • Cofaktoren (z. B. ATP) 
  • Lokalisierung (z.B. zytoplasmatisch) 

Biochemie II

Wie kann der Protein Abbau verhindern werden? 
  • Proteaseinhibitoren
  • Niedrige Temperaturen
  • Wohlfühlpuffer

Biochemie II

Reinigungsmethoden
  • Affinitätschromatographi
  • Anionen-/Kationenaustauscher (DEAE, MonoQ, MonoS, Hydroxylapatit) 
  • Gelfiltration
  • Hydrophoben Interaktionschromatographie
  • Größenausschlusschromatographie

Biochemie II

Position und Funktion von tags
  • N-terminal oder C-terminal
  • Erleichtert Reinigung, erhöht Stabilität, erhöht Löslichkeit
  • Einfluss auf Konformation und Aktivität des Fusionsproteins
  • Entfernung: Schnittstellen (PreScission, TEV) 

Biochemie II

Was ist GST? 
  • GST - Glutathion-S-Transferase
  • Koppel GSH an Xenobiotika und vermittelt deren Export

Biochemie II

Warum Expression eukaryotischer Gene in Prokaryoten? 
Kostengünstiger, mehr Protein, weniger Aufwand

Biochemie II

Arten der Protein-Lipid-Assoziation
  1. Einzelne membrandurchziehende Helix, manchmal mit Fettsäureanker
  2. Mehrer membrandurch-spannende Helices
  3. Membrandurchspannende barrel
  4. Teilinsertierte Helix
  5. Fettsäure- und oligosaccharid-verankerte Proteine
  6. Periphere Proteine, nichtkovalent verankert über membran-durchspannende Proteine

Biochemie II

Einteilung von Lipiden
  1. Fettsäuren
  2. Triacylglycerole (Fette, Öle) 
  3. Wachse (Einfach-Ester von Fettsäuren) 
  4. Phospholipide
  5. Sphingolipide
  6. Isoprenoide (Steroide, Carotinoide etc.) 
  7. Lipopolysaccharide

Biochemie II

Solubilisierung, Reinigung, Rekonstruktion von Membranproteinen
  1. Verwendung milder Detergenzien zur Membran-Solubilisierung (SDS, Triton X-100)
  2. Reinigung
  3. Entfernung des Detergenz, Zugabe von Phospholipiden (Rekonstruktion) 

Biochemie II

Anionische Detergenzien
  • Carboxylate R-Co2
  • Sulfonate R-SO3
  • Sulfate R-So4-
  • Ethersufate
  • Arylsulfonate
  • Phosphate
  • Phosphite
  • Phosphonate
  • Phosphinate
  • Thiosulfate

Biochemie II

Kationische Detergenzien 
  • Primäre Ammoniumsalze
  • Sekundäre Ammoniumsalze
  • Tertiäre Ammoniumsalze
  • Quarternäre Ammoniumsalze
  • Pyridiniumsalze
  • Salze von Amminoxiden
  • Sulfoniumsalze
  • Amminoxide
  • Betaine
  • Sulfobetaine

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