Praktikum Ernährungsphysiologie at Universität Giessen

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Was besagt das Lambert-Beer‘sche-Gesetz?

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Uricase

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Wie kann aus dieser enzymatischen Reaktion die Harnsäure-konzentration ermittelt werden?

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Endpunkt-Methode = Äquilibrium-Methode

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Endpunkt-Methode Vorteile

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Endpunkt-Methode Nachteil

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Kinetische Methode

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Kinetische Methode Vorteil

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Kinetische Methode Nachteile

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Enzymeinheit

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SI-Einheit der Enzymaktivität

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In welchen Organen befinden sich hohe Mengen an Laktat-DH?

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Praktikum Ernährungsphysiologie

Was besagt das Lambert-Beer‘sche-Gesetz?

Bei hinreichend verdünnten Lösungen besteht ein Zusammenhang zwischen der Konzentration (c) der absorbierenden Moleküle und der Durchlässigkeit (D) der Probe. Die Extinktion (Ex) der Probe ist der negative dekadische Logarithmus der Durchlässigkeit und direkt proportional der Konzentration (c) und der Schichtdicke der Messlösung. Oder anders ausgedrückt: Die Extinktion (Ex), also die Verminderung der Intensität des Lichtes ist abhängig vom Extinktionskoeffizienten (ε), von der Stoffmengenkonzentration (c) und von der Schichtdicke der Küvette (d). Die Extinktion ist eine dimensionslose Größe. 

𝐸𝑥=−lg(𝐷)=lg(𝐼0/𝐼𝑑)= 𝜀∙𝑐∙𝑑

Praktikum Ernährungsphysiologie

Uricase

baut Harnsäure (bei 290 nm Licht absorbiert) ab

Praktikum Ernährungsphysiologie

Wie kann aus dieser enzymatischen Reaktion die Harnsäure-konzentration ermittelt werden?

1. Die Endpunkt-Methode
2.Die Kinetische Methode

Praktikum Ernährungsphysiologie

Endpunkt-Methode = Äquilibrium-Methode

Messung vor Zugabe des Enzyms & nach Erreichen des Endwertes. Differenz zw. Ausgangs- & Endwert multipliziert mit einem Faktor entspricht der Harnsäurekonzentration

Praktikum Ernährungsphysiologie

Endpunkt-Methode Vorteile

Enzymmenge, pH, Reaktionstemperatur und selbst das Zeitintervall müssen nicht so genau sein, solange sicher ist, dass die Reaktion beim Endwert angelangt ist, bevor die 2. Messung durchführt wird.

Praktikum Ernährungsphysiologie

Endpunkt-Methode Nachteil

relativ große Enzymmenge benötigt, damit die Erreichung der Endwertes nicht zu lange dauert

Praktikum Ernährungsphysiologie

Kinetische Methode

Geschwindigkeit des Abbaus proportional zur Substratmenge -> durch Steilheit der Kurve = Geschwindigkeit des Abbaus lässt sich c des Substrats ableiten

Praktikum Ernährungsphysiologie

Kinetische Methode Vorteil

schnelle und genaue Messung, nur geringe Enzymmengen notwendig

Praktikum Ernährungsphysiologie

Kinetische Methode Nachteile

Reaktionsbedingungen müssen unbedingt konstant gehalten werden (Messungen bei allen Proben zum gleichen Zeitpunkt)

Praktikum Ernährungsphysiologie

Enzymeinheit

1 Unit (U) = 1 µmol/min; Enzymmenge, die bei 25°C 1 µmol/min umgesetzt wird

Praktikum Ernährungsphysiologie

SI-Einheit der Enzymaktivität

1 Katal (kat) = 1 mol/s -> 1 U = 0,01667 μkat

Praktikum Ernährungsphysiologie

In welchen Organen befinden sich hohe Mengen an Laktat-DH?

im Herzen, der Leber, der Niere, den (Skelett-)Muskeln und den roten Blutkörperchen (wenig)

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