Molekularbiologische Methoden at Leibniz Universität Hannover

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Worin liegen die Nachteile einer PCR?

Totes Ausgangsmaterial nicht von lebendem unterscheidbar
PCR nicht quantitativ -> keine Konzentrationsbestimmung
Kein Rückschluss auf ursprüngliche Menge
Zu viel Templates hemmt DNA
Kleinste Verunreinigungen leicht zu falsch-positiven Ergebnissen, daher IMMER Wasserkontrolle, falls verunreinigte Puffer etc
Hairpins; Primer paaren sich selbst oder Dimerisieren
Primer am 5' Ende nicht pohosphoryliert -> Polynukleotid-Kinase zugeben
Polymerase korrigiert keine Fehler, fällt ab wenn dsDNA erreicht
Mg2+ als wesentliche Stellschraube

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Welche Nachteile hat das Illumina Verfahren?

Fehler durch PCR, relativ viel DNA notwendig
Wechsel zwischen Nukleotideinbau und Signaldetektion
Qualitätserniedrigung am Ende der Sequenzierung
Kurze Leseweiten
Ziemlich teuer und dauert lange

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Genomeditierung bei Pflanzen - Ablauf

1. Erstellen eines binären Pflanzenberktors mit Cas9 und sgRNA

2. Transformation der Zielpflanze

Agrobakterium (schieben Teil ihrer DNA in Pflanzenzelle)
Gene Gun; beschießen der Pflanze mit Goldpartikeln von DNA ummantelt

3. Selektion genomeditierter Zellen

Regeneration ganzer Pflanzen aus den genomeditierter Zellen

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Genomeditierung bei Tieren

Genomeditierung somatischen Zelle
Entnahme von Zellen und Kultivierung
Einbringen von Cas9 und sgRNA
Rückführung in Patienten
Genomeditierung von Keimbahnzellen; einbringen in Oozyte, Zygote oder Blastozysten

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Genomeditierung - Gene Drive

sgRNA ist gegen das Zielgen gerichtet, in das cas9-Gen sowie die zugehörige DNA eingebaut werden
Nach Transformation Hemizygotie
Expression von Cas9 und sgRNA führt zu Einbau in Schwesterchromatin -> Homozygot!!
In Keimbahn
Kann sich in Population ausbreiten, original Gen verschwindet

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Was ist der zytoplasmatische Weg der Proteinsynthese?

Freie Ribisomen im Cytosol
Translation initiiert und endet am zytoplasmatischen Ribisomen
Proteine ohne Zielsequenz bleiben im Cytosol
Nicht glykosyliert oder O-Glykosylierung

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Wozu braucht man Antikörper in der Molekularbiologie?

Erlauben Detektion von rekombinanten Proteinen nach denaturierender Aufreinigung
Antikörper kann für Aufreinigung/Detektion verschiedenyter rekombinanter Proteine genutzt werden, wenn diese getagged sind
AK selbst rekombinant produziert
Lokalisation von Proteinen in der Zelle/Gewebe
Markierung von Zellen

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Über was sind Basen mit dem Zucker verbunden?

Über glykosidische Bindung

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Wie berechnet man die Gewichtsprozent?

%(w/v) = (Masse des Feststoff/Volumen der Lösung) * 100

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Was für eine Formel gibt es bei einer Molaren Lösung?

m = M*c*V

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Warum muss die Zentrifuge aus sein, wenn der Deckel auf ist?

Wegen Korrosion

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Warum muss der Deckel zu sein, wenn die Zentrifuge an ist?

Wegen der Kühlung

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