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Zellkultur
Was bedeutet Konfluenz?
Wachstumsfläche auf dem Boden der Kulturflasche in %
Zellkultur
Was sind sie Arbeitsschritte beim Passagieren mit Trypsin?
1. Zellen unter dem Mikroskop kontrollieren
2. Trypsin auf 37°C vorwärmen
3. Medium von Zellen herunternehmen und Zellen mit PBS (RT) waschen
4. Zellen mit Trypsinlösung überschichten und 3-10 min einwirken (bei 4°C, RT, 37°C,
je nach Zelltyp)
5. Ablösen der Zellen unter dem Mikroskop kontrollieren
=> mind. 90% der Zellen sollten beginnen sich abzurunden bzw. abzuschwimmen
6. mittels Pipette die Zellsuspension resuspendieren (´tritorieren`) und in ein
Zentrifugenröhrchen mit mind. doppeltem Volumen Medium (+10% Serum oder
Trypsininhibitor) überführen und mischen.
Optional:
- Abzentrifugieren der Zellen (300 x g)
- Überstand abnehmen
- Zellpellet in frischem Medium resuspendieren
7. Zellen aussäen (nach vorgegebener Zellzahl oder nach Verdünnungsfaktor)
Zellkultur
Was ist Trypsin, warum mischt man es mit EDTA/EGTA beim Passagieren und was muss beim Passagieren beachtet werden ?
Eine Protease, die die Zell-Matrix-Kontakte verdaut. "Detachment"
Abstoppen der Reaktion mit Serum/Medium erforderlich, damit Oberflächenproteine nicht gespalten werden.
EDTA löst Zell-Zell-Kontakte.
Zellkultur
Welche Methoden gibt es noch zum Passagieren von adhärenten Zellkulturen?
Zellkultur
Wie funktioniert das Shake-off-Verfahren?
!Nur Zellen, die locker an Substrat gebunden sind
ODER
Zellen in Mitose
=> Zellen wachsen synchron
Zellkultur
Was ist der Vorteil und der Nachteil beim Passagieren durch Abschaben?
+ Zellmembranen bleiben unverdaut
- einige Zellen werden mechanisch geschädigt
Zellkultur
Was gehört zur Ausstattung des Sterilbereiches?
Zellkultur
Ausstattung der Sicherheitswerkbank und Zubehör?
Zellkultur
Nenne ein paar wichtige Verhaltensregeln bei Arbeiten an der Sterilbank
Zellkultur
Auf welche 2 Arten kann Temperatur geregelt werden in CO2-Inkubator? Vorteile/Nachteile
Zellkultur
Warum braucht man ein CO2-Inkubator?
Zellkultur
Welche 2 Materialien eigenen sich als Innenauskleidung bei CO2-Inkubator? Vorteile/Nachteile
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