Zellkultur at Hochschule Weihenstephan-Triesdorf

Wachstumsfläche auf dem Boden der Kulturflasche in %

1. Zellen unter dem Mikroskop kontrollieren
2. Trypsin auf 37°C vorwärmen
3. Medium von Zellen herunternehmen und Zellen mit PBS (RT) waschen
4. Zellen mit Trypsinlösung überschichten und 3-10 min einwirken (bei 4°C, RT, 37°C,
je nach Zelltyp)
5. Ablösen der Zellen unter dem Mikroskop kontrollieren
=> mind. 90% der Zellen sollten beginnen sich abzurunden bzw. abzuschwimmen
6. mittels Pipette die Zellsuspension resuspendieren (´tritorieren`) und in ein
Zentrifugenröhrchen mit mind. doppeltem Volumen Medium (+10% Serum oder
Trypsininhibitor) überführen und mischen.
Optional:

- Abzentrifugieren der Zellen (300 x g)
- Überstand abnehmen
- Zellpellet in frischem Medium resuspendieren

7. Zellen aussäen (nach vorgegebener Zellzahl oder nach Verdünnungsfaktor)

Eine Protease, die die Zell-Matrix-Kontakte verdaut. "Detachment"

Abstoppen der Reaktion mit Serum/Medium erforderlich, damit Oberflächenproteine nicht gespalten werden.

EDTA löst Zell-Zell-Kontakte.

• Shake-off
• Abschaben

• Abklopfen
• Abspülen
• innerhalb von 30 min. wiederholen, um Ausbeute zu steigern

!Nur Zellen, die locker an Substrat gebunden sind

ODER

Zellen in Mitose

=> Zellen wachsen synchron

+ Zellmembranen bleiben unverdaut

- einige Zellen werden mechanisch geschädigt

• Sterile Werkbank mit Arbeitsmaterial
• CO2-Inkubator
• Invertmikroskop mit Phasenkontrast 
• Kühlzentrifuge
• Wasserbad
• Schränke
• Kühl/-Gefrierschrank
• Abfallentsorgung
• Waschbecken
• Verbrauchsmaterial

• Vakuumanschluss in der Werkbank und
  Vakuumpumpe außerhalb der Werkbank
• Arbeitsplatte aus Edelstahl,
  Auffangbecken
• Beleuchtung
• UV-Lampe
  (bei 30-50 cm Reichweite zur Keimabtötung)
• Pipettierhilfen

• Werkbank vor und nach der Arbeit 10 min laufen lassen
• Vor Arbeitsbeginn und danach mit 80% Alkohol reinigen
• Nur sterile Sachen in die Werkbank bringen
• Nicht über offene Schalen und Flaschen hantieren
• Werkbank nicht zu voll stellen 

• Temperaturregelung mit Wassermantel
  • hohe Temperaturkonstanz aber langsame Anpassung bei Veränderung
• Temperaturregulung über Luftmantel-Inkubatoren
  • schnelle Temperaturerholung, aber schlechte Konstanz

• alle zelluläre Prozesse sind temperaturabhängig
• Enzyme haben ein Temperaturoptimum 

• Aus Kupfer (Reinigung alle 6 Wochen)
  • Vorteil: Kupfer wirkt bakteriostatisch und fungizid
  • Nachteil: teuer
• Edelstahl (Reinigung alle 2 Wochen)
  • Vorteil: günstiger
  • Nachteil: pflegeintensiver, da Edelstahl Substrat für Kontaminationen