Gentechnik at Hochschule Weihenstephan-Triesdorf

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Erkennungssequenz EcoRI (RE)

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Ablauf unbekanntes Gen sequenzieren? 

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Cofaktor Polymerase

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Wie könnte man den Durchsatz bei der Kapillar Gelektrophorese erhöhen?

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Unterschied transformierte und rekombinante Zellen 

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Klassifikation von Plasmiden: Was für Eig. machen welche Plasmide möglich? (5)

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Aufbau der ABI Prism 310 Geräte (Kapillar) beschreiben: 

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Was sind Didesoxyanaloga und welche Rolle spielen sie bei der Sanger-Sequenzierung?

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Erkennungssequenz BamHI (RE)

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Wichtiges zu Beachten bei der Ligation von Vektor und DNA 

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Messung der Reinheit der DNA Probe

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Absorptionsmaximum Proteine

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Exemplary flashcards for Gentechnik at the Hochschule Weihenstephan-Triesdorf on StudySmarter:

Gentechnik

Erkennungssequenz EcoRI (RE)

GAATTC

klebrige Enden 

Gentechnik

Ablauf unbekanntes Gen sequenzieren? 

  • Einbau in Plasmid 
  • Primer der bei verwendeten Schnittstellen ansetzt 
  • Ermittlung der Basenfolge 

Gentechnik

Cofaktor Polymerase

Magnesium 

Gentechnik

Wie könnte man den Durchsatz bei der Kapillar Gelektrophorese erhöhen?

  • mehrere Kapillaren parallel 
  • Anlegen einer größeren Spannung (nicht so hoch sonst Auflösung ungenau) 

Gentechnik

Unterschied transformierte und rekombinante Zellen 

transformierte: Plasmid wurde eingebracht, evtl. mit sich selbst legiert

rekombinante: Fremdgen eingebaut in Plasmid 

Gentechnik

Klassifikation von Plasmiden: Was für Eig. machen welche Plasmide möglich? (5)

Fertilitäts-Plasmide: setzen Konjugation und Übertragung des Plasmids in Gang 

Resistenzgene: verleihen Resistenzen 

Col-Plasmide: codieren Proteine, die andere Bakterien töten 

Degradative Plasmide: ermöglichen Umsatz ungewöhnlicher Moleküle 

Virulenz Plasmide: machen das Wirtsbakterium pathogen 

Gentechnik

Aufbau der ABI Prism 310 Geräte (Kapillar) beschreiben: 

  • Probelösung wird durch eine mit Acrylamid gefüllte Kapillare in ein Puffergefäß gezogen
  • DNA-Fragmente passieren am Ende der Kapillare einen Laser und den gegenüberliegenden Detektor
  • Anregung der DNA-Fragmente beim Vorbeiströmen am Laser

-> Aufnahme der Fluoreszenz am Fluoreszenzdetektor (CCD-Kamera)

Gentechnik

Was sind Didesoxyanaloga und welche Rolle spielen sie bei der Sanger-Sequenzierung?

  • ähnlich zu Nukleotiden 
  • statt freier OH-Gruppe nur ein H-Atom am C3-Atom 
  • sorgen für Abbruch der Kettenreaktion (Polymerase kann keine Bindungen erstellen)

Gentechnik

Erkennungssequenz BamHI (RE)

GGATCC

klebrige Enden 

Gentechnik

Wichtiges zu Beachten bei der Ligation von Vektor und DNA 

  • Enden von Ziel-DNA und Vektor müssen modifiziert werden -> kompatibel 
  • brauchen 5´-Phosphat und 3´-OH 
  • nach RE-Verdau haben sie das 
  • bei PCR-DNA fehlt das 5´ Phosphat -> phosphorylierte Primer nehmen 
  • Dephosphorylierung durch Phosphatase-Behandlung des Vektors verhindert Selbstligation 

Gentechnik

Messung der Reinheit der DNA Probe

  • OD bei 260 und 280 nm und Quotient bilden (260/280) 
  • Reine DNA = 1.8 ng/L
  • sollte einen Wert über 1.8 haben 
  • bei kleineren Werten ist die DNA verunreinigt zB durch Proteine (280nm) 
  • OD bei 260 und 230nm messen (260/230) -> sollte über 2 ng/L liegen sonst Verunreinigung durch EDTA oder Guanidiniumsalz  

Gentechnik

Absorptionsmaximum Proteine

280 nm 

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