MOP/MGP at Hochschule Mannheim

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Mit welchem Farbstoff hat man die DNA gefärbt im Gel und warum musste das Gel dann unter dem UV-Licht betrachtet werden?

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Gegeben: 3μL DNA-Probe, das Endvolumen soll 50μL sein, Enzyme: EcoRI, BamHI, Enzympuffer ist 20x. Man sollte angeben welche Komponenten man für den Verdau hat und welches Voluman man für diesen benötigt. 


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wofür wird 260nm/280nm bestimmt?

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Wofür wird der blaue Ladepuffer bei der Gelelektrophorese hinzugefügt?
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Wofür wird der blaue Ladepuffer zum Auftrag der Proben in der gelelektrophorese hinzugefügt?

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Wozu wird generell der Elektrophorese-Puffer benötigt

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Bei welcher Wellenlänge wird DNA im Nanodrop gemessen und warum

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Bei welcher Spannung wird die Gelelektrophorese von kleinen Check-Gelen durchgeführt

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Was bestimmt hauptsächlich die Annealing Temp von der PCR des GFP-Gens? Der Tm-Wert der primer oder der Tm Wert von der Ziel/template DNA.

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Nach der Transformation die wir durchgeführt haben wachsen nicht nur fluoreszierende Kolonien, sondern auch weiße. Warum wachsen diese?

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Was bewirkt der Lysepuffer I bzw Lysepuffer II (in dem NaOH und SDS ist?)

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Was ist das Aktivitätsoptimum der meisten Restriktionsenzyme?

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Warum sollte die Menge an Restriktionsenzym-Lösung im Verdau max. 10% sein?

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Exemplary flashcards for MOP/MGP at the Hochschule Mannheim on StudySmarter:

MOP/MGP

Mit welchem Farbstoff hat man die DNA gefärbt im Gel und warum musste das Gel dann unter dem UV-Licht betrachtet werden?

mit GelRed interkalierender Farbstoff - setzt sich in DNA fest -> leuchtet unter UV-Licht
((Gelelektrophorese))

MOP/MGP

Gegeben: 3μL DNA-Probe, das Endvolumen soll 50μL sein, Enzyme: EcoRI, BamHI, Enzympuffer ist 20x. Man sollte angeben welche Komponenten man für den Verdau hat und welches Voluman man für diesen benötigt. 


c1xV1=c2xV2

MOP/MGP

wofür wird 260nm/280nm bestimmt?

Für die Reinheit der DNA

MOP/MGP

Wofür wird der blaue Ladepuffer bei der Gelelektrophorese hinzugefügt?
--------------------------------------------------------------------
Wofür wird der blaue Ladepuffer zum Auftrag der Proben in der gelelektrophorese hinzugefügt?

- Absinken der Probe in die Tasche, wegen der höheren Dichte des Glycerins
- Laufmittelfront wird aufgezeigt
(- Bromphenolblau entspricht bestimmter DNA Fragmentgröße)
(-man sieht dass Taschen beladen sind)

MOP/MGP

Wozu wird generell der Elektrophorese-Puffer benötigt

- puffert bei pH7
- bei diesem pH sind die zu trennenden Substanzen stabil
- Puffer enthält Ionen zur Stromleitung

MOP/MGP

Bei welcher Wellenlänge wird DNA im Nanodrop gemessen und warum

260 nm für DNA und 280nm für Reinheit (falls Proteine drin sind. (aus dem Verhältnis aus 260 zu 280))

MOP/MGP

Bei welcher Spannung wird die Gelelektrophorese von kleinen Check-Gelen durchgeführt

80V (5V pro cm)

MOP/MGP

Was bestimmt hauptsächlich die Annealing Temp von der PCR des GFP-Gens? Der Tm-Wert der primer oder der Tm Wert von der Ziel/template DNA.

Ist abhängig vom Tm Wert der Primer

MOP/MGP

Nach der Transformation die wir durchgeführt haben wachsen nicht nur fluoreszierende Kolonien, sondern auch weiße. Warum wachsen diese?

weil sie ein Plasmid aufgenommen haben mit dem ampizillin resistenzgen

MOP/MGP

Was bewirkt der Lysepuffer I bzw Lysepuffer II (in dem NaOH und SDS ist?)

Lysepuffer I: NaOH lysiert Zellwand und denaturiert die DNA. SDS löst Lipide und Proteine.


Lysepuffer II: zB TRIS EDTA bindet 2wertigen Kationen dadurch werden DNAsen gehemmt. Und Es enthält Essigsäure was zur Neutralisation des pH-werts führt. d.h. die Plasmid DNA kann renaturieren. SDS mit Proteinen fällt aus.


(PowerPoint Präsentation S.39+40)

MOP/MGP

Was ist das Aktivitätsoptimum der meisten Restriktionsenzyme?

pH7
37°C

MOP/MGP

Warum sollte die Menge an Restriktionsenzym-Lösung im Verdau max. 10% sein?

Restriktionsenzympuffer muss man immer dazu geben.
->50% davon sind Glycerin
-> wenn man mehr als 10% Restriktionsenzyme hinzufügt, würde das Glycerin als Inhibitor wirken.
(Restriktionsenzyme würden "Staraktivität" bekommen (schneiden wo sie bock haben))

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