Sero Fakten at Hochschule Bonn-Rhein-Sieg

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Wie nennt man das Phänomen, dass es wegen einem starken Überschuss an AG oder AK nicht zu einer sichtbaren Agglutination kommt?

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Was ist beim FTA Abs im Sorbent enthalten und warum ?

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Was bedeutet ELISA?

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Testprinzip ELISA

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Welche 3 großen Verfahren umfasst der WB?

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Immuninkubation WB

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Warum ist die Bestimmung von IgG AK einfacher als IgM-Nachweis?

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Enzyme in der Serologie

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Nur p41 positiv

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FTA Abs Prinzip

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Indirekter Nachweis

Direkter Nachweis

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Wie sieht ein positiver agglutinationstest aus?

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Sero Fakten

Wie nennt man das Phänomen, dass es wegen einem starken Überschuss an AG oder AK nicht zu einer sichtbaren Agglutination kommt?
Prozonenphänomen

Sero Fakten

Was ist beim FTA Abs im Sorbent enthalten und warum ?
Sorbent enthält Reitertreponemen
So werden kreuzreaktive AK gebunden.

Sero Fakten

Was bedeutet ELISA?
Enzyme-linked immunosorbent assay

Sero Fakten

Testprinzip ELISA
1. Eine Feste Phase (mikrotiterplatte) AG beschichtet

2. Das fragliche AK-haltige Serum wird hinzugegeben -> sind AK enthalten binden sie mit AG -> AG-AK-Komplex 

3. Nach Inkubation wird ungebundenes Serum abgewaschen 

4. Zugabe eines 2. AK (enzymmarkiert, Anti-Human-AK) Enzym POD oder ALP
-> im Konjugat enthalten

5. Liegt ein AG-AK-Komplex vor, lagert sich der 2. AK an
-> AG-AK-AK-Komplex 

6. Abwaschen ungebundener Bestandteile

7. Zugabe von Substrat -> Enzymatisch umgesetzt-> sichtbarer Farbumschlag

8. Abstoppen durch Säure/Lauge 

9. Photometrische Messung mittels ELISA-Reader 

Sero Fakten

Welche 3 großen Verfahren umfasst der WB?
1. SDS-Page ( elektrische Abtrennung nach Größe und molekulargewicht) 

2. Blotten (transferieren der aufgetrennten Proteine auf eine Festphase)

3. Immuno-Inkubation 
Inkubation der AG beladenen Teststreifen mit Patientenserum und Markierung mit einem Enzym -> Sichtabrmachung mittels Substratzugabe

Sero Fakten

Immuninkubation WB
Inkubation der Teststreifen mit Patientenserum

AK binden spezifisch an das entsprechende AG

Überschüssiges wird abgewaschen

Zugabe eines 2. AK mit Enzym konjugiert
(Konjugat)

Substratzugabe -> Sichtbarmachung der AG-AK-Komplexe durch Substratumsatz 

Reaktion wird abgestoppt, Teststreifen getrocknet und mittels Schablone und Vergleich der Banden mit Cut-off ausgewertet

Sero Fakten

Warum ist die Bestimmung von IgG AK einfacher als IgM-Nachweis?
Bei IgM können Rheumafaktoren stören 

-> Vorabsorption nötig 
-> y- Capture-Test (mit RF-Absorbens)

Sero Fakten

Enzyme in der Serologie
POD - Reaktion wird durch Säure abgestoppt (bei Borrelien ELISA)

ALP -Reaktion wird durch Lauge abgestoppt (bei Masern/ Mumps ELISA)

Sero Fakten

Nur p41 positiv
AK Aktivität auf eine aktive Luesinfektion oder eine Luesserumnarbe zurückzuführen -> zum Ausschluss der Kreuzreaktion ist eine Luesserologie notwendig 

Sero Fakten

FTA Abs Prinzip
Serum wird mit Reiterspirochäten zusammengebracht 

Kreuzreagierende AK die ein falsch-positives Ergebnis vermittelt hätten werden so absorbiert 

OT mit abgetöteten Treponema pallifum beschichtet + Patientenserum 

AG-AK-Komplex wird durch fluoreszenz markierten AK unterm Fluoreszenzmikroskop sichtbar gemacht 

Positiv: grün-leuchtende Strukturen 

Sero Fakten

Indirekter Nachweis

Direkter Nachweis
Indirekt = AK wird nachgewiesen und somit das AG indirekt nachgewiesen 

Direkt = AG wird nachgewiesen 

Sero Fakten

Wie sieht ein positiver agglutinationstest aus?
Nach einreiben des Koloniematerials in das getestete Antiserum kommt es zu AG-AK-Komplexbildung durch Vernetzung der Komplexe wird eine Agglutination makroskopisch sichtbar 
-> Ausflockung kann fein oder grob sein

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