Chromatografie at Hochschule Anhalt

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HILIC

Hxdrophylic Interaction Liquid Chromatography

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Wärmeleitfähigkeitsdetektor (WLD ) allgemeines

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Mit welchen Verfahren können organische Ionen getrennt werden ?

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Säulenpflege

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Ziel einer chromatographischen Trennung

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Bonded phases

Vorteile und Nachteile

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Retentionszeit

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Durchflusszeit/Totzeit

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Fronting

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Probenvorbereitung Clean-up Methoden

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Effizienz einer chromatographischen Trennung

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Chromatografie

HILIC

Hxdrophylic Interaction Liquid Chromatography

NPC: stationäre Phase ( SiOH, Amino-; Diol-Phasen, zwitterionische Phasen)

RPC: mobile Phase ( Gemische aus wässrigen Puffern + org. Lsg, wie MeOH, ACN)

IC: polare Analyte ( sehr polare Substanzen; organisch und anorgansiche Ionen)

Chromatografie

Wärmeleitfähigkeitsdetektor (WLD ) allgemeines

  • Typ C
  • übliche Trägergase
  • universell einsetzbar
  • Detektierbarkeit 1 ng
  • dynamischer Bereich 10^7

Chromatografie

extra column effect

  • Peakverbreiterung, die außerhalb der Säule auftreten
  • Bsp: kann es bei einer Kapillare, welche den Säulenausgang mit dem Detektor verbindet zu Rückvermischung & Peakverbreiterung kommen
  • --> Wege zwischen Injektionsstelle, Säule und Detektor kurz halten


Chromatografie

Mit welchen Verfahren können organische Ionen getrennt werden ?

  • IEC
  • ICE
  • IC
  • IPC
  • HPAEC-PAD

Chromatografie

Säulenpflege

  • zum Schutz der Hauptsäule wird eine kleine Vorsäule eingesetzt
  • Equilibrierung der Säule mit der mobilen Phase mit etwa 5-10 Säulenvolumen
  • Säulen sollten nur in der angegebenen Richtung betrieben werden ( Verlust der Auflösung)
  • Säulenmaterialien sind empfindlich gegen Druckstöße
  • Kieselgelphasen können nur in einem pH Bereich von 2-8 betrieben werden
  • Enden sind stets zu verschließen, um ein Austrocknen der Säule zu vermeiden
  • Lagerung der Säule muss in einem geeigneten Lösungsmittel erfolgen 
  • Verhinderung der Hydrolyse und mikrobiellem Befall

Chromatografie

Ziel einer chromatographischen Trennung

  • die einzelnen Komponenten eines Gemisches
  • vollständig voneinander zu trennen
  • mit dem geringst möglichen Aufwand

Chromatografie

Bonded phases

Vorteile und Nachteile

Vorteile:

  • als Normalphase und Umkehrphase verwendbar
  • kurze Äquilibrierzeit
  • gradiententauglich

Nachteile:

  • begrenzte chemische Stabilität
  • Arbeitsbereich pH=2-8

Chromatografie

Retentionszeit

  • Zeit bis zum Auftreten des Peakmaximums
  • charakteristisch für eine bestimmte Substanz bei einem gegebenen chromatographischen System 

Chromatografie

Durchflusszeit/Totzeit

Zeit, die die mobile Phase benötigt, um vom Säulenanfang bis zum Säulenende zu gelangen

Chromatografie

Fronting

  • Verschiebung zu höheren Retentionszeiten
  • Überladung der mobilen Phase
  • Analyt löst sich nicht mehr ausreichend in der mobilen Phase und kondensiert in einigen Säulenbereichen auf der stationären Phase
  • werden nach und nach von reiner Substanz abtransportiert
  • ein Teil der Moleküle verlässt später die Säule

Chromatografie

Probenvorbereitung Clean-up Methoden

  • Zur Abtrennung störender Matrixbestandteile
  • Zur Anreicherung der Analyte

Chromatografie

Effizienz einer chromatographischen Trennung

  • je schlechter sich das GGW einstellen kann, desto breiter die Peaks und desto geringer die Effizient
  • je größer die Anzahl der theoretischen Böden N desto kleiner die Bodenhöhe und desto effizienter ist die Trennung
  • je länger eine Substanz in der Säule ist bzw je höher die Retentionszeit ist, desto stärker ist die Peakverbreiterung

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