BBP Kohlenhydrate at Freie Universität Berlin

• einschichtige Zellanordnung aus Follikelepithelzellen (Thyreozyten)
• Innenraum umschließend (Lumen) -> Ort zur Bildung der Schilddrüsenhormone (T3 + T4)

1. Translation von Thyroglobulin ins ER der Follikelepithelzellen
2. Thyroglobulin-Exozytose ins Lumen
3. Aktiver Transport von Iodid aus dem Blut ins Lumen
4. Iodierung der Thyrosylreste des Thyroglobulins
5. Endozytose von iodierten Thyroglobulin in die Follikelepithelzellen mittels Megalin (TSH-stimuliert)
6. Freisetzung von Thyroxin (T4)
7. Sekretion ins Blut durch Proteolyse

-> pro Tg-Molekül: >100 Tyrosinreste -> 20 werden iodiert -> 10 T3/4-Moleküle

• alle 2 Moleküle lagert sich ein SDS-Molekül an -> Denaturierung
• konstantes Masse/Ladungsverhältnis
• Wandergeschwindigkeit nur noch von Proteingröße abhängig

• dimerisiert durch Reaktion mit primären Aminogruppen von freien Aminosäuren -> Ruhemann's Purpur (570 nm)
• Prolin regiert zu gelbem Produkt (400 nm) -> anderer Reaktionsmechanismus
• Anwendung: DC von Aminosäuren, Forensik: Fingerabdrücke auf Papier
• Positivkontrolle: Glycin
• Leerwert: Natriumacetat

• mobile Phase bewegt sich an stationärer Phase vorbei + nimmt Stoffe unterschiedlich schnell mit
• Verteilung aufgrund von Größe und Fom
• Sephadex G-25 trennt niedermolekulare Moleküle
• UV-Absorption der Peptidbindung bei 195 nm
• Standardlauf: Blue Dextran, Vitamin B12, Tyrosin

• Trennprinzip: elektrostatische WW -> kompetitive WW geladener Ionen; Probenmolekül konkurriert mit Salz-Ionen um geladene Positionen auf Matrix
• Elution: steigende Salzkonzentration (höhere Ionenstärke), pH-Änderung (Protein-Ladung ist pH-abhängig)
• Kationenaustauscher: negativ geladene Matrix, Anionenaustauscher: positiv geladene Matrix -> DEAE

• basierend auf Seliwanow's-Test zur Unterschiedung von Aldosen/Ketosen
• Absorption bei 430 nm
• Neutralzucker im Thyroglobulin: Fucose, Galaktose, Mannose; negativ für NANA, GlcNAc
• Positivkontrolle: Mannose
• Negativkontrolle: Tris-Acetat-Puffer
• Leerwert: Puffer

• Entstehung eines Chromophors
• Absorption bei 620 nm
• Positivkontrolle: NANA
• Negativkontrolle: Mannose
• Leerwert: Startpuffer Anionenaustauscher

- Transfektion: Einbringen fremder DNA/RNA in eukaryotische Zellen

- Methoden:

-> Aufnahme durch Endozytose (Calciumphosphat, DEAE-Dextran, PEI)

-> Fusion mit Zellen (Lipofektion)

-> Elektroporation, Nukleofektion

-> Mikroinjektion

-> Virus-vermittelt, retroviral

• untersch. Zelllinien = untersch. Ansprüche -> Bsp. Neuronen vs HeLa (Neuronen benötigen spezielle Wachstumsfaktoren)
• Biobanken geben Handhabung an -> Eigenschaften, Medien, Konfluidität

• DMEM
• FCS (10 %)
• Glutamin (5 %)
• (Antibiotika)

• Glykoprotein -> N-Glykosyliert
• ca. 2800 AS, 230 kDa
• Homodimer
• ca. 50% der Proteinmenge der Schilddrüse
• sorgt für Synthese von Thyroxin (T4) und Triiodthyronin (T3)
• Funktion: Regulation der Genexpression, erhöhte Stoffwechselaktivität des Protein-Turn-Overs, Kontrolle von Entwicklung + Metabolismus