Molekularbiologie at Frankfurt University of Applied Sciences

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PCR 3.Schritt

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Antibiotikasensitivität

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PCR 1 Schritt

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Vitalitätstest

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PCR 2 Schritt 


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Antibiotikaresistenz beim Vektor 

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(MCS)

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Die Löslichkeit der DNA , durch was was reduziert werden ?

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Wo spielen RNA-Polymerasen eine große Rolle ?

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Replikationsursprung (ori) 

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Antibiotika-Resistenzgen


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T7 Express besitzt beispielsweise eine „lacZ:t7 gene Mutation. 

Was mach lacZ?

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Molekularbiologie

PCR 3.Schritt

Elongation or Extension 

DNA Polymerase Enzym kann mit der Starthilfe primer tragen auf 3´Seite eine OH Gruppe.Bildet also weiter komplementäre Nucleotide. Dazu braucht sie auch dNTPs.auch am zweiter Strang


Temperatur vom Eingesetzen Enzym abhängig normalerweise 72 grad 

bei Ecoli aber 37 deshalb immer wieder neues Enzym sonst bei 90 grad kaputt

Molekularbiologie

Antibiotikasensitivität

Um eine Aussage treffen zu können, wie sensitiv die Bakterien auf die Antibiotika Ampi-
cillin und Kanamycin reagieren, werden die transformationskompetenten Zellen auf Agar-
böden ausplattiert, die jeweils eines dieser beiden Antibiotika enthält.

Molekularbiologie

PCR 1 Schritt

Denaturierung bei 95 grad 

DNA löst sich in zwei Einzelstränge auf 

Molekularbiologie

Vitalitätstest

Aufgrund der beschriebenen Einwirkungen auf die Zelle ist gemäß dem Transformations-
protokoll ein Vitalitätstest durchzuführen. Dabei werden die transformationskompeten-
ten Zellen auf einen LB-Agar ohne Antibiotikazusätze ausplattiert.

Molekularbiologie

PCR 2 Schritt 


Annealing- runtersenken auf 50 grad und Primer dazu.

Primer jeweils für einen Strang , komplementär zu ihm.Also ein primer in 5´und ein Primer in 3´

--> Vervielfältig 

Molekularbiologie

Antibiotikaresistenz beim Vektor 

Wenn Plasmid Ampicilin Restinez hat, wird jede Bakterie die es auch hat resistent gegen Ampiciln sein. Auf verschiedenen Agarplatten auszuprobieren.

Molekularbiologie

(MCS)

multiple cloning site 

Molekularbiologie

Die Löslichkeit der DNA , durch was was reduziert werden ?

Die Löslichkeit der DNA kann durch Zugabe von Alkoholen, wie Ethanol und Isopro-
panol, reduziert werden, so dass es zu einer Fällung der DNA-Moleküle kommt. Dies liegt an der
Reduzierung der Hydrathülle in unpolaren Umgebungen.

Molekularbiologie

Wo spielen RNA-Polymerasen eine große Rolle ?

RNA-Polymerasen spielen generell
eine wichtige Rolle bei der Transkription der DNA („Umschreiben“ der DNA des Gens in RNA) und
damit auch bei der Proteinbiosynthese

Molekularbiologie

Replikationsursprung (ori) 

Der Replikationsursprung (ori) als Startpunkt der Plasmid-Replikation

Molekularbiologie

Antibiotika-Resistenzgen


Das Antibiotika-Resistenzgen zur Vermittlung einer Ampicillin-Resistenz


Molekularbiologie

T7 Express besitzt beispielsweise eine „lacZ:t7 gene Mutation. 

Was mach lacZ?

lacZ: codiert die ß-Galactosidase (Spaltung von Lacotse [Milchzucker] in Glu-
cose und Galactose).

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