Molekularbiologische und biophysikalische Methoden at Fachhochschule Campus Wien

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Welche Vor und Nachteile bringt ein Zweistufiges Nachweissystem mit Antikörpern?

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Was versteht man unter ELISA und welche 3 Gruppen kennen Sie?

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Welche Enzyme stellen sich bei der RNA Isolierung als besonders problematisch dar?

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Auf welchem Prinzip basiert die Methode der Anionenaustauschersäule?

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Welche Rolle spielt Phenol bei der Aufreinigung von Nukleinsäuren bei der Phenolextraktion?

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Wie kann der ungefähre Fortschritt einer Gelelektrophorese beobachtet werden?

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Auf welchem Membrantypen wird beim Southern Blot geblottet?

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Spektrometrie: Bei welchen Wellenlängen können Proteine und Nukleinsäuren detektiert werden?

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Nennen Sie 3 Arten der Verwendung von Oligonukleotiden. Beschreiben Sie kurz nach welchem Prinzip diese Arten funktionieren.

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Wie kann man die Schmelztemperatur von Oligonukleotiden näherungsweise berechnen? (Formel) Nennen Sie 3 Größen, die einen Einfluss auf die Schmelztemperatur haben.

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Welche 3 Schritte gibt es bei der PCR? Beschreiben Sie diese (Temperatur, was passiert)

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Wie unterscheiden sich polyklonale von monoklonalen Antikörpern hinsichtlich deren Interaktion mit dem Antigen?

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Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Welche Vor und Nachteile bringt ein Zweistufiges Nachweissystem mit Antikörpern?

  • +
    • stärkeres Signal
    • günstiger
  • -
    • eventuelle Kreuzkontaminationen
    • höheres Hintergrundsignal
    • längere Dauer

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Was versteht man unter ELISA und welche 3 Gruppen kennen Sie?

Enzyme Linked Immunsorbent Assay - ist ein Antikörperbasiertes Nachweisverfahren

  • Sandwich ELISA
  • Antibody Capture Assay
  • Competitive ELISA

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Welche Enzyme stellen sich bei der RNA Isolierung als besonders problematisch dar?

RNAsen (Ribonukleasen)

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Auf welchem Prinzip basiert die Methode der Anionenaustauschersäule?

Separation anhand der Ladung - negativ geladene DNA bindet an positiv geladene Gruppen der stationären Phase

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Welche Rolle spielt Phenol bei der Aufreinigung von Nukleinsäuren bei der Phenolextraktion?

Phenol ist in der Lage Proteine und Lipide zu lösen, Proteine werden denaturiert. Dadurch können diese von Nukleinsäuren getrennt werden

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Wie kann der ungefähre Fortschritt einer Gelelektrophorese beobachtet werden?

durch Beobachtung der Bromphenolblau Lauffront

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Auf welchem Membrantypen wird beim Southern Blot geblottet?

Nitrozellulose & Nylonfilter

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Spektrometrie: Bei welchen Wellenlängen können Proteine und Nukleinsäuren detektiert werden?

Nukleinsäuren: 260 nm

Proteine: 280 nm

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Nennen Sie 3 Arten der Verwendung von Oligonukleotiden. Beschreiben Sie kurz nach welchem Prinzip diese Arten funktionieren.

  • PCR: Oligos mit 20-35 bp als Primer
  • RNAi: Antisenseoligonukleotide für RNA Interferenz 
  • Sonden: In Situ- Hybridisierung zum Nachweis in Zellen, Nick Translation 

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Wie kann man die Schmelztemperatur von Oligonukleotiden näherungsweise berechnen? (Formel) Nennen Sie 3 Größen, die einen Einfluss auf die Schmelztemperatur haben.

Wallace- Regel: Tm = 4* (G+C) + 2* (A+T)


Einflussgrößen:

  • Basenzusammensetzung
  • Inkubationszeit
  • Länge der Nukleotide
  • chemische Natur der gebildeten Hybride
  • Anteil falscher Basenpaarungen
  • Salzkonzentration der Lösung
  • Zusatz bestimmter adjuvanter Chemikalien

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Welche 3 Schritte gibt es bei der PCR? Beschreiben Sie diese (Temperatur, was passiert)

  • Denaturierung
    • Auftrennen des Doppelstranges
    • 95°C - 15-30 sec
  • Annealing
    • spezifische Anlagerung der Primer - sequenzabhängig
    • 50-65°C (4-5° unter Schmelztemperatur) 10-30 sec
  • Elongation
    • Synthese des neuen Stranges
    • 72°C - 1000bp / min

Diese 3 Schritte beschreiben einen Zyklus der 25-35 mal wiederholt wird

Molekularbiologische und biophysikalische Methoden

Wie unterscheiden sich polyklonale von monoklonalen Antikörpern hinsichtlich deren Interaktion mit dem Antigen?

polyklonale Antikörper sind gegen verschiedene Epitope auf dem Antigen gerichtet , monoklonale Antikörper nur gegen ein einziges Epitop - deswegen sind monoklonale Antikörper spezifischer als polyklonale AK

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