Zellkulturtechnik at Fachhochschule Aachen

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Wie können Impfstoffe (inklusive Antiseren) hergestellt werden, mit welchen Organismen?

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Wozu wird EPO therapeutisch eingesetzt? Durch welche missbräuchliche Bedeutung ist EPO auch bekannt geworden?

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Was versteht man unter der Gastrulation; Beschreibung und Benennung der sich entwickelnden Struktur?
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Mit welchen Zelllinien hat man zu Beginn der 50iger Jahre Impfstoffe hergestellt? Welche Sicherheitsphilosophie für die Reinheit von pharmaproteinen gilt heute?

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Nennen Sie 4 Beispiele von Antikörperkonjugaten und deren Anwendung

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Wodurch unterscheiden sich "differenzierte" Zellen?

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Was meint man mit der Charakterisierung von CD34+ für eine Zelle, welche Zellen sind das?
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Finite cell lines / continuous cell lines: Vergleichende Charakterisierungen.

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Weshalb versucht man den Einsatz von FCS zu vermeiden?

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Weshalb sind in der Zellkulturfermentation Kontamination Z.B. durch Bakterien, ein sehr viel größeres Problem als in der mikrobiellen Fermentation?

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Erläutern Sie die Rolle von Fibroblasten und Osteoblasten im jeweiligen Gewebe (welches Gewebe ist das jeweils)
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Formulieren Sie die chemischen Reaktion bei der Lelair-Biosynthese; was gilt bzgl. der Selektivität der Glykosyltransferasen

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Zellkulturtechnik

Wie können Impfstoffe (inklusive Antiseren) hergestellt werden, mit welchen Organismen?
  • Virusvermehrung auf Zellkulturen
  • Virusvermehrung in Menschen
  • Zelllinie und Hühnerembryo

Zellkulturtechnik

Wozu wird EPO therapeutisch eingesetzt? Durch welche missbräuchliche Bedeutung ist EPO auch bekannt geworden?
Behandlung renaler Anämie (Blutarmut) bei Dialysepatienten; Erhöhung des Hämokrit beim Doping

Zellkulturtechnik

Was versteht man unter der Gastrulation; Beschreibung und Benennung der sich entwickelnden Struktur?
Bildung und Positionierung der drei embryonalen Keimblätter, beim Menschen findet dies nach der Einnistung in die Uterusschleimhaut statt. Die kugelige Blastula ist eine dreilagige Struktur der Gastrula. Aus diesen drei Keimblättern entwickeln sich sämtliche Gewebe und Organe des Körpers.

Zellkulturtechnik

Mit welchen Zelllinien hat man zu Beginn der 50iger Jahre Impfstoffe hergestellt? Welche Sicherheitsphilosophie für die Reinheit von pharmaproteinen gilt heute?
  • 1954 nur diploide Zelllinien (finite cell Line) genutzt, sie wurden von normalem Gewebe gesunder Tiere und Menschen genommen
  • Sind zugelassen für die Herstellung von Humanimpfstoffen Z.B. primäre Affen_Nieren_Zellen
  • Seit 1985 sind auch kontinuierliche Zelllinien zugelassen
  • Regeln heute
  • Nur intakte NHK-Zellen (Tumorzelllinie aus Hamstern) verursachen in Hamstern Tumore
  • Proteine alleine bewirken kein transformierendes Potential
  • max. 100 pg DNA pro Dosis erlaubt (nur knapp über der Nachweisgrenze)
  • die nötige Menge gereinigter oncogener DNA zur in vitro Transformation ist um 10^8 fache höher

Zellkulturtechnik

Nennen Sie 4 Beispiele von Antikörperkonjugaten und deren Anwendung
  • Diagnostische Anwendung von MAKS ELISA
  • Zell Aufreinigung (MACS)
  • Therapeutische Anwendung: Radioimmuntherapie
  • FITC (Floreszenz Farbstoff) → Fluorescentmikroskop

Zellkulturtechnik

Wodurch unterscheiden sich "differenzierte" Zellen?
  • cytoplasmatische Faktoren
  • Lage der Zellen
  • physiologische Beziehungen

Zellkulturtechnik

Was meint man mit der Charakterisierung von CD34+ für eine Zelle, welche Zellen sind das?
CD: Cluster of Differentiation = Oberflächen-Proteine
CD34+: hämapoetische Stammzellen und Vorläuferzellen (blutbildende Stammzellen)

Zellkulturtechnik

Finite cell lines / continuous cell lines: Vergleichende Charakterisierungen.
  • finite cell lines: diploide Zellteilung, begrenzt viele Teilungen, begrenzte Lebensdauer, z.T. Kontaktinhibition
  • continuous cell lines: unbegrenzt viele Teilungen, kürzere Generationsdauer, wachsen in Suspensionen, aneiploider Chromosomensatz (einzelne Chromosomen sind zusätzlich zum üblichen Chromosomensatz vorhanden oder fehlen)

Zellkulturtechnik

Weshalb versucht man den Einsatz von FCS zu vermeiden?
  • Qualitative und quantitative Schwankungen der Inhaltsstoffe : Problem der Qualitätssicherung
  • Kontaminationsrisiko
  • Sehr teuer
  • Limitierter Zugang
  • Hoher Proteingehalt (50g/L) Problem: Trennung

Zellkulturtechnik

Weshalb sind in der Zellkulturfermentation Kontamination Z.B. durch Bakterien, ein sehr viel größeres Problem als in der mikrobiellen Fermentation?
Bakterien vermehren sich schneller als die Zellkulturen → Überwuchungen, nicht reproduzierbar

Zellkulturtechnik

Erläutern Sie die Rolle von Fibroblasten und Osteoblasten im jeweiligen Gewebe (welches Gewebe ist das jeweils)
  • Fibroblasten: Bindegewebe → scheidet Bestandteile der extracellularen Matrix aus (Z.B. Kollagen, Protoglykane) und erhöht damit die Festigkeit (diploide Lungenfibroblasten, diploide Zellen die genutzt werden zur Herstellung biologischer Arzneimittel für die Anwendung am Menschen Z.B. Impfstoff)
  • Osteoblasten: Bindegewebe → sind für die Knochenbildung verantwortlich → sezernieren eine extracellulare Matrix, in die später Calciumphosphatkristalle eingelagert werden

Zellkulturtechnik

Formulieren Sie die chemischen Reaktion bei der Lelair-Biosynthese; was gilt bzgl. der Selektivität der Glykosyltransferasen
Aus einem Zucker-Nukleotid und einem Zucker-Akzeptiert zu einem Zucker-Zucker und einem Nukleotid.
Also es werden 8 Zuckernukleotide zu einem Polysascharid umgebaut .
Es gibt über 100 Glycosyltransferasen

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